[發(fā)明專利]一種GHGKHKNK八肽的制備工藝及醫(yī)藥用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810050685.5
• 申請日: 2008-05-07
• 公開（公告）號: CN101270145A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜培革;田丹;安立萍;姜爽;韓笑;徐廣宇;宋見喜;張成義;申野;孫靜輝;呂剛;李坦
• 申請（專利權(quán)）人: 北華大學(xué)
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 陳宏偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供一種GHGKHKNK八肽的制備工藝，本發(fā)明還公開了其在抗腫瘤轉(zhuǎn)移方面的醫(yī)藥用途，屬于生物化學(xué)中的多肽藥物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近年來，隨著研究的深入，多肽對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用逐漸引起人們的重視。國內(nèi)外學(xué)者通過從動植物中提取、噬菌體肽庫篩選以及化學(xué)合成等方法，得到了一些具有抗腫瘤活性的小分子多肽，這些小肽可以針對腫瘤細胞的生長、發(fā)展的不同環(huán)節(jié)，特異性殺傷、抑制腫瘤細胞的浸潤及轉(zhuǎn)移。1990年Alino等發(fā)現(xiàn)5肽YIGSR(酪氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-絲氨酸-精氨酸)可使肺癌轉(zhuǎn)移能力下降(Alino?SF，Unda?F?J，Perez-Yarza?G.Laminin?surface?binding?sites?and?metastatic?potential?of?3LLtumor?cells，increased?by?indomethacin[J].Biochem?Biophys?ResCommun，1990，167(2)：731-738.)。抗腫瘤的小分子多肽分子量小、活性高，對多藥抗性的腫瘤細胞系也具有良好的抑制活性。同時小分子多肽可以多種方式給藥，不易引起免疫反應(yīng)，且人工化學(xué)合成的生產(chǎn)成本較低，這些都預(yù)示著小分子抗腫瘤肽在臨床方面有很好的應(yīng)用前景。

最近，研究發(fā)現(xiàn)人的高分子激肽原第5結(jié)構(gòu)域中富含組氨酸的區(qū)域能夠選擇性的抑制人臍靜脈和毛細血管上皮細胞的增殖并抑制小鼠角膜新血管的形成，也能夠作為一個抗粘附蛋白與VN競爭，與尿激酶受體結(jié)合，進而抑制上皮細胞的侵襲與粘附。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開一種GHGKHKNK八肽的制備工藝，具有工藝穩(wěn)定，原輔材料來源方便，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)成本低的特點。

本發(fā)明還公開了GHGKHKNK八肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明涉及的GHGKHKNK八肽具有下列一級結(jié)構(gòu)：

Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys

本發(fā)明GHGKHKNK八肽的具體制備工藝如下：

以2-氯-三苯甲基樹脂、4-甲基三苯甲基樹脂、4-甲氧基三苯甲基樹脂或三苯甲基樹脂為起始原料，按固相合成的方法依次連接具有保護基團的氨基酸，獲得保護八肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團，用TBTU或HBTU及HOBT為縮合劑進行接肽反應(yīng)，同步進行脫側(cè)鏈保護基團及切肽，獲得該八肽化合物粗品。再經(jīng)C18(或C8)柱分離純化，冷凍干燥后，制得精品。

按照本發(fā)明，依次連接具有保護基團的氨基酸，獲得保護八肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團的具體步驟包括：

(1)制備Fmoc-Lys(Boc)-樹脂

將以2-氯-三苯甲基樹脂、4-甲基三苯甲基樹脂、4-甲氧基三苯甲基樹脂或三苯甲基樹脂，用DMF浸泡10-60分鐘，使樹脂充分溶脹，加DIPEA或DMPA和Fmoc-Lys(Boc)-OH，10～15℃反應(yīng)1～24小時；

再加入甲醇10～50℃反應(yīng)1～20小時，氮氣吹干，樹脂用DMF洗滌，獲得Fmoc-Lys(Boc)-樹脂；

所說的樹脂取代量為：0.3-1.5mmol/g；粒徑為100～400目；

Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩爾數(shù)為樹脂的2～5倍；

DIPEA或DMPA的摩爾數(shù)為樹脂的2～20倍；

脫帽試劑的加入量以樹脂的重量為基準為5-20ml/g；

甲醇的摩爾系數(shù)為樹脂的2～20倍；

(2)制備Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-樹脂：

在步驟(1)的Fmoc-Lys(Boc)-樹脂中，加入脫帽試劑，10～50℃反應(yīng)10～60分鐘，吹干，分別用DMF和乙醇洗滌，吹干，加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，10～50℃反應(yīng)1～5小時，吹干，分別用DMF和乙醇洗滌，吹干，得到Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-樹脂；

所說的脫帽試劑為：PIP∶DMF＝1∶2～5，體積比；

脫帽試劑的加入量以樹脂的重量為基準為5-20ml/g；

混合物中：Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩爾系數(shù)為樹脂的2～5倍；

TBTU/HBTU和HOBT的摩爾系數(shù)為樹脂的2～5倍；

所說的接肽試劑為：NMM∶DMF＝1∶5～15，體積比；

接肽試劑中，F(xiàn)moc-Asn(Trt)-OH的摩爾系數(shù)為樹脂的2～5倍；