[發(fā)明專利]菱角多糖及其提取方法及其藥物用途

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810050667.7
• 申請(qǐng)日: 2008-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN101264110A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 牛鳳蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K36/185
• 分類號(hào): A61K36/185;A61K31/715;A61P35/00;A61P15/00;C08B37/00;A61K131/00
• 代理公司: 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 魏征驥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

菱角(Water?caltrop)被中華人民共和國藥典(2005年版一部)及中藥大辭典所收載，為菱科植物菱的果實(shí)，具有清熱、解渴、健脾、益氣明目之功效。前期的實(shí)驗(yàn)表明菱角的水提物具有良好的抗腫瘤活性，對(duì)于菱角多糖部分的活性尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。

惡性腫瘤已經(jīng)成為人類生命的三大殺手之一，醫(yī)學(xué)界在尋求和使用抗癌藥物的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)許多化學(xué)抗癌藥物在作用于靶細(xì)胞時(shí)往往累及正常細(xì)胞，但植物藥的遺傳毒性不太明顯，表明中草藥在抗癌抗突變方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢和廣闊的應(yīng)用前景。近些年來單味中藥及中藥復(fù)方防治腫瘤作用的研究已取得一定成績。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種菱角多糖及其提取方法及其藥物用途。本發(fā)明菱角多糖是由下列制備方法得到的：

一、稱取菱角皮置于提取器內(nèi)，以8～10倍體積的蒸餾水浸泡8～10天，加熱煮沸3～4小時(shí)，過濾后再以3～5倍體積的水重復(fù)提取1～2次，合并深色提取液，過濾，濃縮至相對(duì)密度1.15-1.20(50℃)；

二、加入2～3倍量95％乙醇沉淀，并不斷攪拌，過濾，將沉淀加水充分溶解，3000rpm離心15min，去除不溶性雜質(zhì)；

三、用2～3倍量95％乙醇沉淀，4℃，靜置15-20小時(shí)，3000rpm離心15min；沉淀依次用95％乙醇、無水乙醇脫水，再用乙醚脫去乙醇后，置于盛有P₂O₅及NaOH的真空干燥器內(nèi)真空干燥，得粗多糖；

四、粗多糖純化

a、將粗多糖溶解，配成5％的糖液，氯仿-正丁醇溶液體積比為1∶0.2，按粗多糖溶液與氯仿-正丁醇溶液，體積比為(2-5)∶1，加入一具塞容器中，振蕩30min，離心15min，吸取上層水相保留，棄掉氯仿相與蛋白沉淀，按上述方法重復(fù)除蛋白3次，干燥；

b、除色素，采用活性炭法脫色，將多糖配成5％的糖液，加3％的活性炭，70℃水浴中加熱2小時(shí)，冷卻，抽濾除去活性炭。

本發(fā)明菱角多糖在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供菱角多糖及其制備方法，菱角多糖具有抗腫瘤作用。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，菱角多糖對(duì)Hela、U₂₅₁細(xì)胞有明顯的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。本發(fā)明藥物用法用量，口服劑量以生藥量計(jì)算0.5克-3克/次，一日三次。

附圖說明

圖1是24h后對(duì)照組Hela細(xì)胞。

圖2是多糖處理24h后Hela細(xì)胞。

圖3是24h后對(duì)照組U₂₅₁細(xì)胞。

圖4是多糖處理24h后Hela細(xì)胞。

圖5菱角多糖對(duì)U₂₅₁細(xì)胞的生長抑制曲線。

圖6菱角多糖對(duì)Hela細(xì)胞的生長抑制曲線。

具體實(shí)施方式

下面通過具體藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步證明其抗腫瘤作用。

1.MTT法測定多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用

取對(duì)數(shù)生長期的人宮頸癌細(xì)胞Hela，人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U₂₅₁接種于96孔板中，每孔100μL，密度為8×10⁴·mL^-1，置于37℃、5％CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的多糖，使其終濃度分別為：1000、500、250、125、62.5、31.25，15.625、7.8125μg·mL^-1，每個(gè)劑量設(shè)3個(gè)平行孔，對(duì)照孔以等體積的IMDM代之。將培養(yǎng)板置37℃、5％CO₂的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后，加入MTT，每孔20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，吸出培養(yǎng)液，加入DMSO?150μL，震蕩10min后置酶標(biāo)儀上于570nm波長測各孔吸光度值，各重復(fù)孔的吸光度值取平均值，計(jì)算菱角多糖各組分對(duì)Hela，U₂₅₁細(xì)胞的抑制率。

抑制率計(jì)算公式為：

2.結(jié)果與分析

2.2菱角多糖對(duì)Hela和U₂₅₁細(xì)胞的體外抑瘤作用

2.2.1細(xì)胞形態(tài)的變化倒置顯微鏡下觀察對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)隨著菱角多糖濃度的增加Hela和U₂₅₁細(xì)胞的增殖受到明顯抑制。