[發明專利]一種聚己內酯降解菌株及其選育方法

無效

• 申請號: 200810050489.8
• 申請日: 2008-03-11
• 公開（公告）號: CN101245364A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 王戰勇;王巖;于丹;陳珊
• 申請（專利權）人: 東北師范大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N1/14;C12R1/80
• 代理公司: 長春市東師專利事務所
• 代理人: 劉延軍;李榮武

1、一種聚己內酯降解菌株的選育方法，其特征是將采集的活性污泥放入組分為PCL0.15％，MgSO₄·7H₂O?0.05％，NH₄Cl₂?0.1％，CaCl₂·2H₂O?0.0005％，KH₂PO₄?0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O1.194％，pH?6.8分離液體培養基中，置恒溫搖床中振蕩培養，直至渾濁的培養液變得澄清為止，取一定量的培養液，采用平板稀釋涂布法進行分離，選菌落周圍有明顯透明圈的菌落進一步純化；

將選擇到的具有降解聚己內酯能力的菌株接種到固體斜面培養基上，該固體斜面培養基組分為PCL?0.15％，MgSO₄·7H₂O?0.05％，NH₄Cl₂?0.1％，CaCl₂·2H₂O?0.0005％，KH₂PO₄?0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O?1.194％，瓊脂2％，pH?6.8，培養至出現大量分生孢子；

以無菌水沖洗，將分生孢子沖洗入裝有玻璃珠的三角瓶中，振蕩，使分生孢子分散，顯微鏡檢查，使孢子濃度為10⁶~10⁷個/ml；

滅菌平皿中裝有分生孢子懸液，在磁力攪拌下用紫外燈照射，處理后的懸液在無菌室紅燈照射下適當稀釋；

取上述懸液涂布于固體平板培養基上，避光培養，選取單菌落，點植法培養，觀察并定期測量菌落周圍水解透明圈的大小，初步篩選水解透明圈較大的菌株；

根據初篩結果，從固體平板培養基平皿中挑取需要的單菌落接入同上固體斜面培養基，待長滿后接入同上液體培養基中，搖瓶培養，通過檢測發酵液中PCL解聚酶的活力進一步篩選。

2、按照權利要求1所述的一種聚己內酯降解菌株的選育方法，其特征是將采集的活性污泥放入組分為PCL?0.15％，MgSO₄·7H₂O?0.05％，NH₄Cl₂?0.1％，CaCl₂·2H₂O?0.0005％，KH₂PO₄0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O?1.194％，pH?6.8的分離液體培養基中，置恒溫搖床中振蕩培養，直至渾濁的培養液變得澄清為止，取一定量的培養液，采用平板稀釋涂布法進行分離，選菌落周圍有明顯透明圈的菌落進一步純化；

將選擇到的具有降解PCL能力的菌株接種到固體斜面培養基上，固體斜面培養基組分為PCL?0.15％，MgSO₄·7H₂O?0.05％，NH₄Cl₂?0.1％，CaCl₂·2H₂O?0.0005％，KH₂PO₄?0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O1.194％，pH?6.8，另添加2％的瓊脂，28℃培養6天至出現大量分生孢子；

以無菌水沖洗，將分生孢子沖洗入裝有玻璃珠的三角瓶中，28℃振蕩15min，使分生孢子分散，顯微鏡檢查，使孢子濃度為10⁶~10⁷個/ml；

滅菌平皿中裝有5ml分生孢子懸液，在磁力攪拌下用30W紫外燈，照射距離10cm照射，照射時間為20~80s，處理后的懸液在無菌室紅燈照射下適當稀釋；

取上述懸液0.1ml涂布于固體平板培養基上，避光培養3天，選取單菌落，點植法培養，觀察并定期測量菌落周圍水解透明圈的大小，初步篩選合適菌株；

根據初篩結果，從固體平板培養基平皿中挑取需要的單菌落接入同上固體斜面培養基，待長滿后接入同上液體培養基中，28℃搖瓶培養120h。

3、按權利要求1、2所述的選育方法選育的聚己內酯降解菌株，該菌株為青霉(Penicillium.sp)YD0401-Ae，已于2008年1月16日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址：北京朝陽區大屯路，保藏號為CGMCC?No.2344。