[發(fā)明專利]用甲基營養(yǎng)酵母生產(chǎn)重組人表皮生長因子受體2胞內區(qū)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810050272.7
• 申請日: 2008-01-21
• 公開（公告）號: CN101492675A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發(fā)明（設計）人: 顏煒群;韓冬;徐煌
• 申請（專利權）人: 吉林圣元科技有限責任公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;C07K14/71;C12R1/84
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種使用甲基營養(yǎng)酵母生產(chǎn)重組人her2/neu?ICD蛋白的方法，該方法包 括：在以甲醇為碳源和能源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)甲基營養(yǎng)酵母，其中所說的甲基營養(yǎng) 酵母是用包括下列可操作地連接的元件的DNA構建體轉化的：(1)甲基可誘導的 轉錄啟動子；(2)編碼人her2/neu?ICD的DNA片段；(3)轉錄終止子和(4)可 選擇標志，從而以至少100mg/L培養(yǎng)基的濃度得到重組人her2/neu?ICD蛋白。

2、根據(jù)權利要求1的方法，其中所說的甲基營養(yǎng)酵母是巴斯德畢赤酵母， 并且所說的甲基可誘導的啟動子和轉錄終止子均來自巴斯德畢赤酵母AOX1基 因。

3、用于表達重組人her2/neu?ICD的甲基營養(yǎng)酵母培養(yǎng)物，該酵母能夠依靠 作為碳源和能源的甲醇生長，并且該酵母是被包括甲基可誘導的轉錄啟動子、編 碼人her2/neu?ICD的DNA片段、轉錄終止子和可選擇標志的DNA構建體轉化 的。

4、用于在巴斯德畢赤酵母中表達重組人her2/neu?ICD蛋白的DNA構建體， 該構建體包括可操作地連接的元件：甲基可誘導的轉錄啟動子、編碼人her2/neu ICD的DNA片段、轉錄終止子和可選擇標志。

5、根據(jù)權利要求4的構建體，其中所說的甲基營養(yǎng)酵母是巴斯德畢赤酵母， 并且甲基可誘導的啟動子和轉錄終止子均來自巴斯德畢赤酵母AOX1基因。

6、使用巴斯德畢赤酵母大規(guī)模生產(chǎn)重組人her2/neu?ICD蛋白的優(yōu)化的發(fā)酵 培養(yǎng)條件，特征在于其中發(fā)酵溫度維持在28℃～30℃、所使用的pH值為4.4、 發(fā)酵液的DO值(溶解氧)保持在25％～30％、并且培養(yǎng)基中添加有0.5％(W/V) 的蛋白胨。

7、純化her2/neu?ICD的方法，特征在于使用陽離子交換層析技術分離。