[發明專利]一種檢測乳腺癌石蠟包埋組織抗原的量子點免疫熒光試劑盒及應用

無效

• 申請號: 200810048733.7
• 申請日: 2008-08-08
• 公開（公告）號: CN101339188A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發明（設計）人: 陳創;李雁;龐代文;朱小波;夏和順
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬組織免疫熒光技術領域，具體涉及一種檢測乳腺癌石蠟包埋組織抗原的量子點免疫熒光試劑盒，適用于人乳腺癌組織抗原的準確、定量檢測以及量子點標記的鏈霉親和素復合物探針(QDs-SA)應用中的質量控制，還涉及該試劑盒在定量檢測人乳腺癌組織抗原中的用途。

背景技術

人乳腺癌相關標志物，比如人類表皮生長因子受體2(HER2)，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)等在乳腺癌分子靶向治療、預后判斷及化療方案選擇中具有重要作用，準確檢測非常重要。目前檢測的主要方法是，利用待測組織靶抗原的特異性抗體與組織靶抗原結合后，采用顯色試劑盒中酶標記的親和素或已知抗體(或抗原)作為探針，通過酶-底物顯色來反映待測組織靶抗原的量。目前市場上已有多種酶底物顯色試劑盒，最常用的是DAB(3，3-二氨基聯苯胺)顯色試劑盒。采用這種試劑盒對組織抗原的檢測存在敏感性有限、實驗室間差異較大，結果判斷主觀性等不足，其中酶-底物顯色反應的控制程度是導致產生差異的主要原因之一；這種試劑盒中的DAB為致癌物質，對人體有一定的傷害作用；而且采用這種試劑盒難以對抗原實現準確、定量檢測。

組織免疫熒光技術是采用熒光物質標記的親和素或已知抗體作為探針，與待測組織靶抗原結合，使形成的抗原抗體復合物上帶有熒光物質，在激發光照射下，熒光物質發出明亮熒光，以此來檢測抗原并通過熒光強度進行量化。該技術1941年由Coons等創建，發展至今已有很大的進展，已在現代生物學和醫學領域廣泛應用。但以異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)、羅丹明(rhodamine)為代表的傳統熒光染料，其熒光效率及強度均不理想，且熒光易漂白及易受組織自發熒光干擾，而難以廣泛用于常規分子病理學檢測。

量子點(Quantum?dots，QDs)是一類大小在1～10nm，半徑小于或接近于激子玻爾半徑的新型半導體納米晶粒，自1998年在生物醫學領域應用以來，隨著QDs制備及修飾技術的進步，逐漸引起臨床應用的關注，將其作為一種新型納米熒光材料探針，能克服傳統有機熒光染料的不足，具有激發光譜寬、連續，檢測靈敏度高，抗光漂白能力強，熒光強度高而穩定，生物相容性好，不易受組織自發熒光干擾等特點。目前所國內外采取的QDs檢測組織抗原的方法主要是將量子點直接與一抗或二抗結合制成探針，進行多抗原同時標記，這種方法成本較高，實用性不強，難以與目前臨床現有的檢測體系相結合，探針保存期有限，難以常規臨床應用。目前尚無用于檢測乳腺癌石蠟包埋組織抗原的QDs-SA免疫熒光試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種檢測乳腺癌石蠟包埋組織抗原的量子點免疫熒光試劑盒，該試劑盒可與目前臨床上檢測乳腺癌組織抗原的生物素化抗體相結合；更重要的是，采用該試劑盒能夠經濟、快速、靈敏、準確地對組織抗原進行定量檢測。

本發明的另一個目的是提供一種量子點免疫熒光試劑盒在檢測人乳腺癌石蠟包埋組織抗原中的應用，該試劑盒可簡便、快速、靈敏、高效地對組織抗原進行定量檢測。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術措施：一種檢測乳腺癌石蠟包埋組織抗原的量子點免疫熒光試劑盒，其特征是：該試劑盒中包括a)封閉液，b)清洗液，c)生物化抗體稀釋液，d)封片液，和e)量子點標記的鏈霉親和素復合物探針液；采用水溶性CdSe/ZnS核殼型量子點標記的鏈霉親和素復合物(QDs-SA)作為熒光探針，與目前臨床上現有的檢測乳腺癌石蠟包埋組織抗原的生物素化抗體相結合，間接標記石蠟包埋乳腺癌組織中的抗原；所述的封閉液由三羥基氨基甲烷-鹽酸(TBS)緩沖液(0.005-0.02M/L，PH?7.2-7.6)與100％牛血清白蛋白(BSA)按質量百分比100∶1-3配制；清洗液由三羥基氨基甲烷-鹽酸(TBS)緩沖液(0.005-0.02M/L，PH?7.2-7.6)與吐溫-20按體積百分比1000∶0.2-1配制；生物素化抗體稀釋液由三羥基氨基甲烷-鹽酸(TBS)緩沖液(0.005-0.02M/L，PH?7.2-7.6)與100％牛血清白蛋白(BSA)按質量比100∶1-3配制；封片液由三羥基氨基甲烷-鹽酸(TBS)緩沖液(0.005-0.02M/L，PH?7.2-7.6)與無熒光甘油按照體積比1∶7-10配制；量子點標記的鏈霉親和素復合物探針由水溶性CdSe/ZnS核殼型量子點標記的鏈霉親和素復合物(QDs-SA)溶液(量子點濃度0.5-1μM/L，激發波長590-620nm)和上述的生物素化抗體稀釋液按照體積百分比1∶10-200配制。