[發明專利]一種用于胎膜早破診斷的試紙條及試劑盒

無效

• 申請號: 200810046729.7
• 申請日: 2008-01-21
• 公開（公告）號: CN101216493A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發明（設計）人: 王宇波
• 申請（專利權）人: 創源生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 武漢開元專利代理有限責任公司
• 代理人: 唐正玉

1.一種用于胎膜早破診斷的試紙條，試紙條水平面自上而下依次為：吸收墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊，其特征在于：硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質控線，其中檢測線為單克隆抗體11B6，質控線為兔抗鼠IgG抗體；金標墊上涂覆有膠體金標記的單克隆抗體14A3；再將吸收墊、包被有檢測線和質控線的硝酸纖維素膜、涂覆有膠體金標記的單克隆抗體14A3的金標墊、樣品墊按自上而下的順序依次粘附在不吸水的支撐薄片上組裝而成，且在樣品墊上設有一加樣孔。

2.根據權要求1所述的用于胎膜早破診斷的試紙條，其特征在于：所述單克隆抗體11B6和14A3的制備方法：(1)用羊水特異性蛋白AMNI-Pr免疫BALB/c小鼠：取含150μg的羊水特異性蛋白AMNI-Pr蛋白溶液與等體積的弗氏完全佐劑乳化后注射小鼠腹腔，21天后，取含150μg的羊水特異性蛋白AMNI-Pr蛋白溶液與等體積的弗氏不完全佐劑乳化后注射小鼠腹腔，最后于融合前三天或與第一次免疫時間相隔4周以上，再在BALB/c小鼠的腹腔進行強化免疫，抗原量加倍到300μg，不加佐劑；(2)融合時，取經最后強化免疫的BALB/c小鼠一只，眼眶放血處死，收集陽性血清，在濃度75％酒精溶液中浸泡5min消毒，無菌取出小鼠脾臟，分離出脾細胞，與新鮮制備的SP2/0骨髓瘤細胞，按1～2×107個SP2/0與108個免疫脾細胞1∶10～1∶15的比例于50mL離心管中混勻，1500rpm，離心10min，倒掉上清，將裝有細胞混合物的離心管放于37℃水浴中，然后在1min內慢慢滴入預溫至37℃的濃度為50％聚乙二醇(PEG)0.8mL，邊加邊用吸管尖攪拌，繼續攪拌1min；然后加入37℃預溫的PRMI-1640基礎液10mL，PRMI-1640購自GIBCO，具體方法為：第一分鐘逐滴滴入1mL，第二分鐘加1mL，第3～4分鐘加3mL，第5分鐘加其余的5mL，最后加入30mL?PRMI-1640液，800rp阻離心5min，去上清，于37℃放置5～8min；用HAT培養基懸浮；(3)將用HAT培養基懸浮的細胞混合物分種于96孔培養板中250μL/孔，每孔接種量含104個SP2/0細胞，于37℃，濃度為5％CO₂培養箱中培養，融合后的第二天開始觀察有無污染，于第4天補加1滴HAT培養基，第8～10天吸去100μL培養基換HT培養基100μL，待融合細胞集落長至培養孔1/4，培養基變黃時，進行抗體檢測；采用免疫原作為篩選抗原，利用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法篩選出分泌抗AMNI-Pr的陽性孔；(4)對篩選出來的陽性孔用有限稀釋法進行克隆、篩選，經過3～4次克隆，最終篩選出分泌兩株抗AMNI-Pr的單克隆雜交瘤細胞，這兩株細胞編號為：14A3和11B6。

3.一種用于胎膜早破診斷的試劑盒，其特征在于：將所述的試紙條、樣品稀釋液、棉簽、離心管、吸管放置在同一個盒中，樣品稀釋液為濃度0.85％的生理鹽水。