[發明專利]重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O基因、重組蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 200810045412.1
• 申請日: 2008-06-27
• 公開（公告）號: CN101302526A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 喻坤;王保寧;陳丹;楊衛平
• 申請（專利權）人: 四川省邁克科技有限責任公司
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C07K14/315;C12N15/63;C12N15/70
• 代理公司: 成都惠迪專利事務所
• 代理人: 梁田

1、一種具有SEQ?ID?NO：1所示核酸序列的重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O基因。

2、一種具有SEQ?ID?NO：2所示氨基酸序列的重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白。

3、一種制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，包括下述步驟：

(1)從溶血鏈球菌中分離基因組DNA，用PCR方法得到重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O?cDNA；

(2)用步驟(1)獲得的cDNA序列與表達質粒重組，重組子經過DNA測序驗證，確定重組質粒的序列和閱讀框均正確；

(3)用步驟(2)的表達載體轉化表達宿主細胞；

(4)培養宿主細胞并從培養基中回收和純化重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白。

4、根據權利要求3所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述表達載體為能與重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的基因序列重組形成表達質粒的表達載體。

5、根據權利要求4所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述的載體為原核表達載體。

6、根據權利要求5所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述原核表達載體為PET32a(+)。

7、根據權利要求3所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述的表達宿主細胞為能夠表達所述表達質粒的表達宿主細胞。

8、根據權利要求3所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述的表達宿主細胞為大腸桿菌Rosseta?gami?II(DE3)。

9、根據權利要求3所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述培養基采用含抗生素基礎培養基擴增培養宿主細胞，參數為：培養溫度35℃-37℃，培養時間4～5h；誘導溫度22℃～25℃，誘導時間14～18h；誘導物IPTG終濃度為0.2～0.5mM。

10、根據權利要求3所述的制備SEQ?ID?NO：2所示重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述重組可溶性溶血鏈球菌溶血素O蛋白通過工程菌誘導培養后離心收集菌體，超聲破碎后取上清經過鎳柱一步純化得到。