[發(fā)明專利]磺酸化膽汁酸酶熒光毛細(xì)分析法及酶熒光定量試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810045260.5
• 申請(qǐng)日: 2008-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN101221129A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李永生;高秀峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種測定磺酸化膽汁酸(SBA)的酶熒光毛細(xì)分析法，其特征在于：先將一個(gè)代替常規(guī)熒光試液槽的毛細(xì)管定位座置于熒光光度計(jì)或自動(dòng)臨床熒光生化分析裝置光路中；由β-NAD⁺、電子傳遞體、刃天青等構(gòu)成的熒光反應(yīng)液(1)與適量生物樣品(S)混勻后，在適當(dāng)溫度下反應(yīng)一定時(shí)間，用一個(gè)固定有磺酸化膽汁酸磺酸酯酶(BSS)(6)和β-羥基類固醇脫氫酶(β-HSD)(7)、稱為磺酸化膽汁酸毛細(xì)生物反應(yīng)器(SBA-CBR)(2)的毛細(xì)管(3)，利用毛細(xì)現(xiàn)象吸入上述反應(yīng)混合液(8)，然后插入熒光光度計(jì)的毛細(xì)管(3)定位座插孔中，在給定的激發(fā)波長和發(fā)射波長條件下，立即測定SBA-CBR(2)內(nèi)所含反應(yīng)混合液的熒光強(qiáng)度，此值作為樣品和試劑空白值(F₁)；然后使其繼續(xù)反應(yīng)數(shù)分鐘后，再測其熒光強(qiáng)度(F₂)；此值減掉樣品和試劑空白值(ΔF＝F₂-F₁)，得到的吸光度增加值(ΔF)用于定量樣品(S)中的SBA值。毛細(xì)管(3)做為熒光反應(yīng)、測定或酶固定化的載體。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：被測樣品(S)在BSS(6)催化作用下水解形成3β-羥膽汁酸，然后在β-HSD(7)的催化作用下與β-NAD⁺反應(yīng)，生成NADH；NADH與氧化型電子傳遞體(從心肌黃酶、1-MPMS、麥爾多拉藍(lán)等電子傳遞體類中選1種)反應(yīng)形成還原型電子傳遞體，后者與刃天青反應(yīng)生成試鹵靈，測定其熒光強(qiáng)度來定量SBA。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：可制成含有一個(gè)SBA-CBR(2)和一種熒光反應(yīng)液(1)的SBA固定化酶熒光定量試劑盒(IE-SBA-FCA-Kit)。如果SBA-CBR(2)內(nèi)表面固定有BSS(6)和β-HSD(7)，熒光反應(yīng)液(1)含有β-NAD⁺、電子傳遞體和刃天青時(shí)將成為一種高靈敏SBA固定化酶熒光定量試劑盒(HIE-SBA-FCA-Kit)。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：可制成SBA-CBR(2)內(nèi)表面同時(shí)固定有BSS(6)和β-HSD(7)、熒光反應(yīng)液(1)只含有β-NAD⁺的低靈敏SBA固定化酶熒光定量試劑盒(LIE-SBA-FCA-Kit)，通過測定NADH的熒光強(qiáng)度來定量SBA。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：SBA-CBR(2)內(nèi)表面可單獨(dú)固定BSS(6)，將β-HSD包含在熒光反應(yīng)液(1)內(nèi)而形成的定量試劑盒。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：也可以由含有一個(gè)空白SBA-CBR(2)和一個(gè)測定SBA-CBR(2)組成固定化酶熒光定量雙毛細(xì)管試劑盒(IE-SBA-FCA-2C-Kit)。即，空白SBA-CBR(2)內(nèi)表面固定有β-HSD(7)和熒光反應(yīng)液(1)，測定SBA-CBR內(nèi)表面固定有BSS(6)、β-HSD(7)和熒光反應(yīng)液(1)的試劑盒。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：將各種酶類不固定化，可形成一種測定SBA的液態(tài)酶熒光毛細(xì)分析法，即，在一個(gè)空白管和一個(gè)測定管內(nèi)加入被測樣品(S)，再分別將含有β-HSD(7)和熒光反應(yīng)液(1)的1號(hào)液加入空白管內(nèi)，將含有BSS(6)、β-NAD⁺和熒光反應(yīng)液(1)的2號(hào)液加入測定管內(nèi)；反應(yīng)一定時(shí)間后，依次將上述兩管中的反應(yīng)混合液(8)吸入毛細(xì)管(3)內(nèi)，插入熒光光度計(jì)的毛細(xì)管(3)定位座中，在給定的激發(fā)波長和發(fā)射波長條件下，測定毛細(xì)管(3)內(nèi)所含反應(yīng)混合液(8)的熒光強(qiáng)度；根據(jù)空白管(F₁)和測定管(F₂)的熒光強(qiáng)度差值(ΔF＝F₂-F₁)定量樣品(S)中的SBA值。

8.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：由1號(hào)液、2號(hào)液和定量毛細(xì)管(3)可構(gòu)成高靈敏SBA液態(tài)酶熒光定量試劑盒(HLE-SBA-FCA-Kit)；是1號(hào)液含有β-HSD(7)和熒光反應(yīng)液(1)，2號(hào)液含有BSS(6)、β-HSD(7)和熒光反應(yīng)液(1)的SBA定量試劑盒。