[發(fā)明專利]磷酸腺苷變化情況的比值分析法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810045040.2
• 申請日: 2008-03-24
• 公開（公告）號: CN101545855A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高瑞豐
• 申請（專利權(quán)）人: 高瑞豐
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/50
• 代理公司: 成都立信專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 黃 立

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化學(xué)指標分析領(lǐng)域，特別是磷酸腺苷的變化情況分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)

常見的磷酸腺苷包括一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)，其中三磷酸腺苷(ATP)在臨床上有著廣泛的應(yīng)用，是用于治療進行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心機能不全、心肌疾患及肝炎等疾病的輔酶類藥物，被稱為人體內(nèi)的“能量貨幣”，目前針對ATP發(fā)展了許多專用的分析方法，主要有層析法、電泳法和光學(xué)分析法等，其目的都是為了能夠定量的標定所測生化物質(zhì)中ATP的含量情況，以電泳法為例，通常以0.05mol/L，pH為3.0的檸檬酸溶液作緩沖液，處理過的新華二號濾紙為支持介質(zhì)，濕法點樣，電壓梯度18～20V/cm，電泳1.75h。電泳畢，吹干濾紙，于紫外燈照射下剪出各吸收斑點，在0.01mol/L?HCl溶液浸泡1h，過濾，測定上清液A257，按照吸收系數(shù)計算出ATP含量。這些方法普遍存在流程復(fù)雜、操作繁復(fù)、操作精度要求高等問題，而在實際運用中，有大量的工作其實僅需定性的測定植物中ATP的變化情況，無須定量分析ATP的含量，傳統(tǒng)方法在此時就更顯得繁復(fù)而且成本高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決定性分析磷酸腺苷含量變化情況中存在的技術(shù)問題，以提供一種操作簡單，測定結(jié)果精準確的磷酸腺苷變化情況的分析方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。

本發(fā)明的磷酸腺苷變化情況的比值分析法，包括如下步驟：

a)將作為基礎(chǔ)組的待測植物葉片去污后測定鮮重；

b)將植物葉片置于試管中，并加入三羥甲基甲胺(Tris)緩沖液(0.5M?pH7.6)，加入比例為每克植物葉片鮮重加入三羥甲基甲胺(Tris)緩沖液97～130ml；

c)將試管水浴加熱5～20min，之后常溫冷卻10～30min，過濾得到提取液；

d)將提取液以高速離心機進一步除雜分離后，將提取液倒入比色杯中，超過1/2以上高度；

e)在波長為259nm下用分光光度計測定比色杯中提取液的吸光度；

f)將作為實驗組的待測植物葉片去污后測定鮮重，重復(fù)步驟b～e，測定比色杯中提取液的吸光度；

g)以步驟f測得吸光度值除以步驟e所測得吸光度值，得到比值數(shù)據(jù)；

h)重復(fù)步驟a～g，取得至少三組或三組以上的比值數(shù)據(jù)；

i)以順序方式排列的組號為橫坐標，以步驟h所得每組組號相對應(yīng)的比值數(shù)據(jù)為縱坐標，繪制曲線，從而得到磷酸腺苷變化比值的曲線圖。

前述的磷酸腺苷變化情況的比值分析法，其中所述的三羥甲基甲胺(Tris)緩沖液(0.5M?pH7.6)的配制步驟方法為，以蒸餾水300～500ml溶解三羥甲基氨基甲胺60.57g，加入鹽酸(1N)約420ml，以鹽酸(1N)或氫氧化鈉(1N)調(diào)整溶液PH值至7.6，加入蒸餾水至溶液總量為1000ml，置于4℃條件下保存。

本發(fā)明的磷酸腺苷變化情況的比值分析法的有益效果：

1.流程簡潔；

2.分析結(jié)果準確、直觀；

3.成本低。

附圖說明

圖1蜈蚣草磷酸腺苷變化情況比值曲線圖

具體實施方式

本發(fā)明的原理：ATP是三磷酸腺苷的英文縮寫符號，它是各種活細胞內(nèi)普遍存在的一種高能磷酸化合物。高能磷酸化合物是指水解時釋放的能量在20.92kJ/mol(千焦每摩爾)以上的磷酸化合物，ATP水解時釋放的能量高達30.54kJ/mol。ATP的分子式可以簡寫成A-P～P～P。簡式中的A代表腺苷，P代表磷酸基團，～代表一種特殊的化學(xué)鍵，叫做高能磷酸鍵。ATP的水解實際上是指ATP分子中高能磷酸鍵的水解。高能磷酸鍵水解時能夠釋放出大量的能量，ATP分子中大量的化學(xué)能就儲存在高能磷酸鍵中。因為A(腺苷)在259納米具有光吸收，所以259納米的光吸收可以看做為A的總量，以植物葉片為例，由于DNARNA中的A在植物葉片完整的情況下仍保留在葉內(nèi)，所以此時光吸收可以看做ATP、ADP、AMP的總量。

利用基礎(chǔ)組與實驗組ATP、ADP、AMP的光吸收總量之比作為測定參數(shù)，較之將ATP單獨分離出來作定量測定，可大大縮短檢定流程，并可準確反映磷酸腺苷在被測物中的變化情況。

1.方法與步驟

a)將作為基礎(chǔ)組的蜈蚣草植物葉片去污后測定鮮重(測定數(shù)據(jù)見表1)；

b)將植物葉片置于試管中，并加入15ml三羥甲基甲胺(Tris)緩沖液(0.5M?pH7.6)；