[發(fā)明專利]日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶基因、編碼蛋白及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810044093.2
• 申請日: 2008-12-11
• 公開（公告）號: CN101748140A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓澤廣;劉鋒;馮正;胡薇
• 申請（專利權(quán)）人: 上海人類基因組研究中心
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/04;A61K39/00;A61K48/00;C12Q1/32;C07K16/40;A61P33/12
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種3-磷酸甘油醛脫氫酶，特別是涉及一種日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶的基因、蛋白及應(yīng)用。

背景技術(shù)

血吸蟲病由血吸蟲的感染引起，在世界上有76個國家，受感染者約1.5億。致病的血吸蟲有3種，既日本血吸蟲(Schistosoma?japonicum)，曼氏血吸蟲(S.mansoni)和埃及血吸蟲(S.haematobium)。在我國流行的是日本血吸蟲。血吸蟲病的流行給人民身體健康和經(jīng)濟(jì)發(fā)展都造成巨大的損失，因此，防治血吸蟲病、開發(fā)研制血吸蟲臨床診斷試劑和抗血吸蟲的藥物具有巨大的社會和經(jīng)濟(jì)效益。

日本血吸蟲作為寄生蟲能在人體和動物體內(nèi)存在很多年而不被宿主的免疫機(jī)制殺死，與它的免疫逃避能力有關(guān)。其免疫逃避機(jī)制有抗原模擬、抗原偽裝和免疫調(diào)節(jié)。其中免疫調(diào)節(jié)指的是血吸蟲的蛋白能夠調(diào)節(jié)、干擾(主要是抑制)宿主的免疫系統(tǒng)，使其不能發(fā)揮正常的免疫攻擊效能，從而有利于血吸蟲的生存。

血吸蟲的排泄/分泌抗原(Excretory/Secretory?protein，ESP)就是一類可以發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)。這些蛋白來自血吸蟲的表皮和腸道上皮，或者是特化的排泄/分泌器官。血吸蟲各個蟲期都產(chǎn)生這類蛋白。ESP是潛在藥物靶點(diǎn)和疫苗分子，因?yàn)橐种七@些蛋白可以干擾血吸蟲的免疫逃避機(jī)制從而增強(qiáng)宿主的免疫殺滅功能；ESP是潛在的診斷分子，因?yàn)檫@些蛋白游離于宿主的血液中，可以很方便地用現(xiàn)有手段檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶基因、其編碼的蛋白及應(yīng)用，該3-磷酸甘油醛脫氫酶是潛在的藥物靶標(biāo)和診斷分子。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶的基因，包括：具有SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列。

所述的SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列編碼具有SEQ?ID?NO.4所示序列的蛋白。

所述的SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列編碼具有SEQ?ID?NO.5所示序列的蛋白。

所述的SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列編碼具有SEQ?ID?NO.6所示序列的蛋白。

本發(fā)明的日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶，包括：

具有SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發(fā)生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白，該蛋白是具有SEQ?ID?NO.1序列編碼的蛋白；

具有SEQ?ID?NO.5所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發(fā)生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白，該蛋白是具有SEQ?ID?NO.2序列編碼的蛋白；

具有SEQ?ID?NO.6所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發(fā)生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白，該蛋白是具有SEQ?ID?NO.3序列編碼的蛋白。

雖然3-磷酸甘油醛脫氫酶被認(rèn)為是組成型蛋白，而研究發(fā)現(xiàn)3-磷酸甘油醛脫氫酶其實(shí)是多功能蛋白，可以定位在膜上，也就是作為膜蛋白發(fā)揮作用。在血吸蟲排泌蛋白中發(fā)現(xiàn)的GAPDH可能來自血吸蟲的表皮。另外，3-磷酸甘油醛脫氫酶也可能被特定的分泌器官或細(xì)胞分泌，因?yàn)樵谝环N厭氧的寄生原蟲痢疾變形蟲就是特定的分泌細(xì)胞來分泌出3-磷酸甘油醛脫氫酶到宿主體液中。

本發(fā)明通過利用蛋白質(zhì)組學(xué)手段，分析了日本血吸蟲的體外提取的ESP的組成成分，發(fā)現(xiàn)日本血吸蟲的3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate?dehydrogenase，GAPDH)是其ESP的主要成分之一，表明該蛋白可能在血吸蟲的免疫調(diào)節(jié)、免疫逃避方面發(fā)揮重要作用。另外，通過直接分析日本血吸蟲感染動物(兔子)的血液，發(fā)現(xiàn)該3-磷酸甘油醛脫氫酶的確在宿主血液中也存在，因此，3-磷酸甘油醛脫氫酶是潛在的藥物靶標(biāo)和診斷分子。

本發(fā)明的日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶作為免疫原，可應(yīng)用于制備血吸蟲疫苗；作為潛在的藥物作用靶點(diǎn)，應(yīng)用于篩選化學(xué)和其他種類藥物；作為特異性血吸蟲抗原，應(yīng)用于制備抗血吸蟲抗體；應(yīng)用于血清學(xué)診斷方面；日本血吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶的編碼基因，在基因治療方面的應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1日本血吸蟲排泌蛋白的分離和鑒定實(shí)驗(yàn)

1).日本血吸蟲成蟲排泌產(chǎn)物的制備和蛋白提取：