[發明專利]日本血吸蟲烯醇化酶基因、其編碼蛋白及應用

無效

• 申請號: 200810044090.9
• 申請日: 2008-12-11
• 公開（公告）號: CN101748139A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 劉鋒;韓澤廣;馮正;胡薇
• 申請（專利權）人: 上海人類基因組研究中心
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02;A61K39/00;A61K48/00;C12Q1/26;C07K16/40;A61P33/12
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

技術領域

本發明涉及生物基因領域，具體地涉及一種日本血吸蟲烯醇化酶基因、其編碼蛋白及應用。

背景技術

血吸蟲病由血吸蟲的感染引起，在世界上有76個國家，受感染者約1.5億。致病的血吸蟲有3種，既日本血吸蟲(Schistosoma?japonicum)，曼氏血吸蟲(S.mansoni)和埃及血吸蟲(S.haematobium)。在我國流行的是日本血吸蟲。血吸蟲病的流行給人民身體健康和經濟發展都造成巨大的損失，因此，防治血吸蟲病、開發研制血吸蟲臨床診斷試劑和抗血吸蟲的藥物具有巨大的社會和經濟效益。

日本血吸蟲作為寄生蟲能在人體和動物體內存在很多年而不被宿主的免疫機制殺死，與它的免疫逃避能力有關。其免疫逃避機制有抗原模擬、抗原偽裝和免疫調節。其中免疫調節指的是血吸蟲的蛋白能夠調節、干擾(主要是抑制)宿主的免疫系統，使其不能發揮正常的免疫攻擊效能，從而有利于血吸蟲的生存。

血吸蟲的排泄/分泌抗原(Excretory/Secretory?protein，ESP)就是一類可以發揮免疫調節作用的蛋白質。這些蛋白來自血吸蟲的表皮和腸道上皮，或者是特化的排泄/分泌器官。血吸蟲各個蟲期都產生這類蛋白。ESP是潛在藥物靶點和疫苗分子，因為抑制這些蛋白可以干擾血吸蟲的免疫逃避機制從而增強宿主的免疫殺滅功能；ESP是潛在的診斷分子，因為這些蛋白游離于宿主的血液中，可以很方便地用現有手段檢測。

發明內容

本發明要解決的技術問題之一是提供一種日本血吸蟲烯醇化酶基因。

本發明要解決的技術問題之二是提供一種日本血吸蟲烯醇化酶基因的編碼蛋白。

本發明要解決的技術問題之三是提供上述種日本血吸蟲烯醇化酶基因及編碼蛋白的應用。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現：

在本發明的一方面，提供了一種日本血吸蟲烯醇化酶基因，包括：具有SEQ?IDNO.1～SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列。

所述的SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列編碼具有SEQ?ID?NO.4所示序列的蛋白；所述的SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列編碼具有SEQ?ID?NO.5所示序列的蛋白；所述的SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列編碼具有SEQ?ID?NO.6所示序列的蛋白。

在本發明的另一方面，提供了一種日本血吸蟲烯醇化酶，包括：

具有SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白；

具有SEQ?ID?NO.5所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白；

具有SEQ?ID?NO.6所示氨基酸序列的蛋白、或由該蛋白發生一個或多個氨基酸的置換、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白。

日本血吸蟲烯醇化酶是非典型的分泌蛋白，可以由血吸蟲分泌到宿主血液中，發揮免疫調控作用，我們用網上軟件SecretomeP?2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/SecretomeP/)預測發現，烯醇化酶的NN-score值為0.511，說明日本血吸蟲的烯醇化酶是非典型的分泌蛋白，即該蛋白的分泌不是通過蛋白N端的信號肽(經典方式)，而是通過其他途徑分泌出細胞。這說明在宿主血清中檢測到血吸蟲烯醇化酶不是偶然的。

傳統的看法認為烯醇化酶是細胞內的糖酵解酶，而近來的研究表明烯醇化酶是多功能內蛋白。該酶除了定位在細胞內，還存在于細胞的表面，對于血吸蟲來說，這種酶還是表皮蛋白，原核、真核生物的烯醇化酶可以和纖溶酶原(plasminogen)結合，血吸蟲的烯醇化酶也可以結合血液中的纖溶酶原。血吸蟲分泌的烯醇化酶可能會刺激纖維蛋白溶解活性，以利于血吸蟲入侵和在宿主體內的移動。

本發明利用蛋白質組學手段，我們在國際上首次分析了日本血吸蟲的體外提取的ESP的組成成分。我們發現日本血吸蟲的烯醇化酶(Enolase)是其ESP的主要成分之一，表明該蛋白可能在血吸蟲的免疫調節、免疫逃避方面發揮重要作用；同時，通過直接分析感染動物(兔子)的血液，發現該蛋白的確在宿主血液中也存在，這也使它成為很好的診斷標記分子。