[發明專利]一種八肽膽囊收縮素的制備方法

有效

• 申請號: 200810043920.6
• 申請日: 2008-11-11
• 公開（公告）號: CN101463072A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 徐紅巖;王衛國
• 申請（專利權）人: 吉爾生化（上海）有限公司
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;C07K7/06
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司
• 代理人: 張勁風

1.一種八肽膽囊收縮素的制備方法，其特征是包括以下步驟：

(1)制備保護的八肽膽囊收縮素-樹脂復合物：向裝有樹脂的砂芯反應器中加入二甲基甲酰胺，靜置，過濾，向反應器中加入八肽膽囊收縮素的C端氨基酸及酯化試劑進行反應，所述的氨基酸依次添加順序為N-(9-芴甲氧羰酰基)-苯丙氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-4-{N-[1-(4，4-二甲基-2，6-二氧環己基乙烯基)-3-甲基丁基]氨}芐酯-天冬氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-蛋氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-色氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-甘氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-蛋氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-磺酸鈉基-酪氨酸、N-(9-芴甲氧羰酰基)-4-{N-[1-(4，4-二甲基-2，6-二氧環己基乙烯基)-3-甲基丁基]氨}芐酯-天冬氨酸，反應結束后，加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，并過濾，向反應器中加入哌啶和二甲基甲酰胺混合溶液進行脫保護反應，反應結束后加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，向反應器中加入C端第二個氨基酸和縮合試劑縮合，縮合反應結束后加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，過濾，按照多肽從C端到N端的順序，更換氨基酸，重復脫保護和縮合反應，得到保護的八肽膽囊收縮素-樹脂復合物；

(2)制備八肽膽囊收縮素-樹脂復合物：向裝有保護的八肽膽囊收縮素-樹脂復合物的反應器中加入脫保護試劑進行脫保護反應，反應結束后過濾，并加入二甲基甲酰胺洗滌樹脂，過濾，得到八肽膽囊收縮素-樹脂復合物；

(3)切割，制備八肽膽囊收縮素粗品：向裝有八肽膽囊收縮素-樹脂復合物的反應器中加入切割試劑進行切割反應，反應結束后，過濾，收集濾液，旋蒸后得到八肽膽囊收縮素粗品；

(4)粗品經高效液相色譜純化得到八肽膽囊收縮素精品：采用C₁₈類型的反相色譜柱分離純化八肽膽囊收縮素粗品，得到八肽膽囊收縮素精品。

2.根據權利要求1所述的一種八肽膽囊收縮素的制備方法，其特征是步驟

(1)中所述的樹脂為王氏樹脂、苯乙酰胺甲基樹脂或羥甲基樹脂中的一種。

3.根據權利要求1所述的一種八肽膽囊收縮素的制備方法，其特征是步驟

(1)中所述的酯化試劑為N，N′-二異丙基碳二亞胺、1-羥基苯并三氮唑和二甲氨基吡啶，酯化試劑物質的量之比n(C端氨基酸)∶n(二異丙基碳二亞胺)∶n(1-羥基苯并三氮唑)∶n(二甲氨基吡啶)∶n(樹脂)＝4∶4∶3∶0.5∶1；所述的縮合試劑為O-苯并三氮唑-N，N，N，N，-四甲脲六氟磷酸酯、1-羥基苯并三氮唑和二異丙基乙胺，縮合試劑物質的量之比n(氨基酸)∶n(O-苯并三氮唑-N，N，N，N，-四甲脲六氟磷酸酯)∶n(1-羥基苯并三氮唑)∶n(二異丙基乙胺)∶n(樹脂)＝3∶3∶3∶6∶1。?

4.根據權利1要求的一種八肽膽囊收縮素的制備方法，其特征是步驟(2)中所述的脫保護試劑為：體積比為1％～5％肼和二甲基甲酰胺混合溶液，反應條件為：20℃～60℃下反應5min～60min。

5.根據權利1要求的一種八肽膽囊收縮素的制備方法，其特征是步驟(3)中所述的切割試劑為：體積比為20％氨水和四氫呋喃混合溶液，切割反應條件為：20℃下反應24h。

6.根據權利1要求的一種八肽膽囊收縮素的制備方法，其特征是步驟(4)中所述的分離條件為：制備柱為C₁₈類型，流動相為水、乙酸銨水溶液、乙腈、甲醇中的一種或幾種。?