[發明專利]一種制備β－淀粉樣多肽1－42純品的方法

有效

• 申請號: 200810043145.4
• 申請日: 2008-02-22
• 公開（公告）號: CN101235076A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 徐紅巖;任麗萍;李冬冬
• 申請（專利權）人: 吉爾生化（上海）有限公司
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司
• 代理人: 張勁風

技術領域：

本發明涉及一種多肽的制備方法，特別涉及一種利用高效液相色譜制備β-淀粉樣多肽1-42純品的方法。

背景技術：

阿爾茨海默病(Alzheimer’sDisease，AD)是一種發病率高、危害極大的中樞神經系統退行性疾病，主要臨床癥狀是智力進行性減退，特征性病理學改變是老年斑，神經元纖維纏結，以海馬、皮層區域為主的神經元數目減少。β-淀粉樣多肽1-42(Amyloidβ1-42peptide，簡稱Aβ42)是存在于阿爾茨海默病患者腦組織中的特異病理改變之物，同時它在AD患者的腦積液及血漿中有所改變。研究表明Amyloidβ1-42peptide在腦內的沉積是阿爾茨海默病的主要原因，因此純品Amyloidβ1-42peptide對阿爾茨海默病的病理研究有非常重要的作用。

目前對Amyloidβ1-42peptide粗品的制備方法報道的很少，而使用高效液相色譜方法進行制備的報道僅有一篇(Vydac?Advance，1997)，且要求有柱溫箱，使用的流動相體系比較繁瑣，不利于用于生產工藝。

發明內容：

本發明的目的是提供一種用高效液相色譜方法制備Amyloidβ1-42peptide純品的方法。以解決現有高效液相色譜方法進行制備存在的設備要求高、使用的流動相體系比較繁瑣的技術問題。

本發明的技術方案如下：

一種制備β-淀粉樣多肽1-42純品的方法，采用高效液相色譜方法。包括以下步驟：

1、β-淀粉樣多肽1-42粗品的溶解在乙腈水溶液中，超聲處理，濾膜過濾，取濾液待用。

2、以高效液相色譜儀對過濾后粗品進行制備，通過制備色譜柱采用紫外檢測器對樣品進行監測，分段收集需要的目標產物，制備色譜條件為：

色譜柱：PLRP-S(剛性聚合物填料)，10-15μm，21.2×250mm(I.D)，

流動相：A：100％水/0.1-0.2％三氟乙酸

????????B：100％乙腈/0.1-0.2％三氟乙酸

時間(min)?????????A??????????????B

0.01??????????????90-70％????????10-30％

25????????????????10-30％????????70-90％

30????????????????90-70％????????10-30％

流速：15ml/min

波長：220nm

3、以分析高效液相色譜儀對收集到的目標產物進行檢測，將含量95％以上部分合并為合格產品。

4、將合格產品進行濃縮、冷凍干燥，得到白色絮狀粉末產品，經檢測合格即為最終產品。

按照本發明，所述的Amyloidβ1-42peptide的高效液相色譜制備方法，色譜柱是使用聚苯乙烯-聚乙烯基苯為基質的聚合物樹脂填料。

本發明所述的流動相體系為水、乙腈體系，加入0.1-0.2％三氟乙酸作為離子對試劑。

本發明所用的樣品溶解條件為體積比：乙腈∶水＝30-50∶70-50。

本發明所述的樣品上樣量為21.2mm內徑的制備柱每針上樣品100-200mg。

本發明的有益效果：解決了現有Amyloidβ1-42peptide的純品制備方法使用的流動相都比較繁瑣，而且要使用柱溫箱，增加了儀器的生產成本，也不利于放大生產的技術問題，本發明所述的制備方法，使用的流動相是在高效液相色譜中非常常用的試劑，除了高效液相色譜儀不再需要別的儀器，既節省成本又能夠簡單、快速地得到需要的純品。

附圖說明：

圖1為PLRP-S填料色譜柱的粗品色譜圖；

圖2為C18鍵合相填料色譜柱的粗品色譜圖；

圖3為三氟乙酸乙腈由30％到50％的制備色譜圖；

圖4為三氟乙酸乙腈由10-30％到90-70％的制備色譜圖；

圖5為合格產品的檢測色譜圖。

具體實施方式：β-淀粉樣多肽1-42粗品的溶解，過濾：稱取100-200mg?β-淀粉樣多肽1-42粗品溶于10ml的乙腈水溶液中，乙腈水溶液由30-50％乙腈與70-50％水的混配，超聲處理，待樣品完全澄清，用0.45μ有機相濾膜(上海亞東核級樹脂有限公司)過濾，取濾液待用。

色譜條件：