[發(fā)明專利]一種廣譜性癌癥原位雜交綜合檢測試劑盒及檢測方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810042266.7
• 申請日: 2008-08-29
• 公開（公告）號: CN101363052A
• 公開（公告）日: 2009-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裘建英;張?jiān)聘?/a>
• 申請（專利權(quán)）人: 芮屈生物技術(shù)（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 翟羽

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說關(guān)于一種廣譜性癌癥原位雜交綜合檢測試劑盒及檢測方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】

根據(jù)國內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的資料，我國每年癌癥的新增人數(shù)170萬，死亡人數(shù)近160萬，患者600萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數(shù)接近800萬，患者約有8400萬人，到2020年以上人數(shù)將翻一番，這是一組可怕的數(shù)字。

2005年美國衛(wèi)生研究院、癌癥研究院、疾控中心等多家單位做了一個年度報(bào)告，“認(rèn)為人類在抗癌大戰(zhàn)中是失敗”，也就是說癌癥死亡率沒有降低，其列舉出造成抗癌大戰(zhàn)失敗的幾個因素是：1.腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性；2.腫瘤細(xì)胞耐藥性；3.抗癌藥物設(shè)計(jì)思路不完善等。同時，該報(bào)告中亦提出應(yīng)重新審視現(xiàn)有診治癌癥的措施。

本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致癌癥死亡率不降的另二個重要原因是：1.不能做到真正的早期診斷；2.轉(zhuǎn)移的病理機(jī)制不清楚。依照傳統(tǒng)的醫(yī)學(xué)影像及和其它生化(如蛋白標(biāo)記物)指標(biāo)來診斷癌癥，認(rèn)為占位性癌塊在2公分下是屬于早期癌癥的診斷(更小些有時無癥狀體征)，這一概念值得認(rèn)真討論。影像醫(yī)學(xué)的2公分以下癌塊屬早期這一界定科學(xué)性是不夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)模瑥募?xì)胞學(xué)角度，1公分的腫塊約有一億個腫瘤細(xì)胞，2公分的腫塊其三維空間的細(xì)胞疊加數(shù)遠(yuǎn)不止2億個腫瘤細(xì)胞，從癌變前期到單克隆癌細(xì)胞產(chǎn)生及形成2公分的癌塊，其病理演變過程相當(dāng)長，可能是一年或兩年、甚至三年以上，很難證實(shí)的是在這個過程中，腫塊是癌癥唯一的發(fā)生地和單獨(dú)的病灶。臨床上已證實(shí)：一旦形成腫塊的同時，其他癌細(xì)胞通過不同途徑遷移到其他部位克隆生長；一旦切除原發(fā)灶后，其他器官復(fù)發(fā)灶或多發(fā)癌塊灶先后形成或轉(zhuǎn)移。因此，在臨床上以2公分以下的腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴(yán)謹(jǐn)(有些病例，在發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶時，同時發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶，不在我們表述的內(nèi)容中)，這時已經(jīng)是晚期了，這是導(dǎo)致癌癥死亡率不降的真正原因。

隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開，許多致癌和癌癥相關(guān)基因相繼報(bào)道。至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成(單克隆時)或早期癌細(xì)胞外逸、轉(zhuǎn)移時，就能做到早期預(yù)測準(zhǔn)確的診斷。

研究人員在西班牙巴塞羅拉召開的歐洲癌癥大會上公開了這一發(fā)現(xiàn)，TROP-2基因在許多癌癥表達(dá)過多，與3/4癌癥發(fā)生有關(guān)，被懷疑是致癌基因。意大利科學(xué)家表示，他們對老鼠和實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞做了試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TROP-2基因在許多癌癥中表達(dá)過度。他們分析了許多種腫瘤，最后發(fā)現(xiàn)其中65到90％癌癥內(nèi)都含有大量具有非凡活性的TROP-2基因。平均起來，TROP-2基因在74％的癌癥中扮演著不容忽視的角色，它也是許多不同癌癥的獨(dú)特標(biāo)志，如胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、子宮癌。以前知道TROP-2基因在胎兒在子宮的發(fā)育以及后來細(xì)胞分裂和生長都扮演著重要角色。

弗吉尼亞大學(xué)的泌尿?qū)W與分子生理學(xué)教授Dan?Theodorescu博士領(lǐng)導(dǎo)的科學(xué)小組研究表明，RhoGDI2基因與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移有關(guān)系，當(dāng)RhoGDI2基因在癌細(xì)胞中有活性時，細(xì)胞就產(chǎn)生一種能夠阻止癌細(xì)胞浸入到其他器官的蛋白，該項(xiàng)研究發(fā)表在2006年11月15日期的《癌癥研究》(《cancer?research》)雜志上。本發(fā)明人在對大量樣本——廣泛性腺癌(肝、肺、腎、胃、子宮、卵巢、乳房、直腸等組織細(xì)胞)檢測中觀察到，肝癌病人伴有轉(zhuǎn)移者，RhoGDI2基因表達(dá)量降低或零表達(dá)，該指標(biāo)有重要的臨床價(jià)值。RhoGDI2基因表達(dá)量降低或零表達(dá)，證明肝癌已轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。RhoGDI2基因已被公認(rèn)為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，我們在研究中證實(shí)RhoGDI2基因與癌癥轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且具有廣譜性。我們檢測了近800例各種類型癌癥患者(大部分已轉(zhuǎn)移)血液標(biāo)本，近800例正常對照組人群，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，癌癥患者體內(nèi)RhoGDI2基因表達(dá)量為8％左右，正常人群表達(dá)量平均為50％，病例組中有600多例該基因是零表達(dá)。同時檢測兩個家族性癌癥好發(fā)家屬的直系親屬，該基因的表達(dá)量比正常人表達(dá)量都低。

目前對TROP-2和RhoGDI2基因的檢測技術(shù)多用于科研方面，臨床應(yīng)用未見報(bào)道，特別是個性化的應(yīng)用在全世界未見報(bào)道。根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料TROP-2和RhoGDI2基因的檢測技術(shù)及診斷試劑盒屬空白。