[發明專利]一種TTF1基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 200810042254.4
• 申請日: 2008-08-29
• 公開（公告）號: CN101363047A
• 公開（公告）日: 2009-02-11
• 發明（設計）人: 張云福;裘建英
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所
• 代理人: 翟羽

【技術領域】

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種TTF1基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用。

【背景技術】

根據國內外權威機構提供的資料，我國每年癌癥的新增人數170萬，死亡人數近160萬，患者600萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數接近800萬，患者約有8400萬人，到2020年以上人數將翻一番，這是一組可怕的數字。

2005年美國衛生研究院、癌癥研究院、疾控中心等多家單位做了一個年度報告，“認為人類在抗癌大戰中是失敗”，也就是說癌癥死亡率沒有降低，其列舉出造成抗癌大戰失敗的幾個因素是：1.腫瘤細胞異質性；2.腫瘤細胞耐藥性；3.抗癌藥物設計思路不完善等。同時，該報告中亦提出應重新審視現有診治癌癥的措施。

本發明人在研究中發現，導致癌癥死亡率不降的另二個重要原因是：1.不能做到真正的早期診斷；2.轉移的病理機制不清楚。依照傳統的醫學影像及和其它生化(如蛋白標記物)指標來診斷癌癥，認為占位性癌塊在2公分下是屬于早期癌癥的診斷(更小些有時無癥狀體征)，這一概念值得認真討論。影像醫學的2公分以下癌塊屬早期這一界定科學性是不夠嚴謹的，從細胞學角度，1公分的腫塊約有一億個腫瘤細胞，2公分的腫塊其三維空間的細胞疊加數遠不止2億個腫瘤細胞，從癌變前期到單克隆癌細胞產生及形成2公分的癌塊，其病理演變過程相當長，可能是一年或兩年、甚至三年以上，很難證實的是在這個過程中，腫塊是癌癥唯一的發生地和單獨的病灶。臨床上已證實：一旦形成腫塊的同時，其他癌細胞通過不同途徑遷移到其他部位克隆生長；一旦切除原發灶后，其他器官復發灶或多發癌塊灶先后形成或轉移。因此，在臨床上以2公分以下的腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴謹(有些病例，在發現原發病灶時，同時發現轉移病灶，不在我們表述的內容中)，這時已經是晚期了，這是導致癌癥死亡率不降的真正原因。

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成(單克隆時)或突破血管壁早期轉移時，就能做到早期預測診斷。

TTF1基因被認為是致肺癌的協同基因，TTF1基因的表達增高，表示病人已患肺癌且多數已轉移。美國冷泉港實驗室的科學家發現了位于人類第14號染色體上TTF1和NKX2-8、PAX9基因有協同致肺癌發生和導致轉移，進一步研究表明TTF1和NKX2-8、PAX9基因能再激活一種早期的胎兒基因表達模式，導致肺癌產生和轉移，TTF1基因與20％肺癌癌變有關，他們發現這些基因的異常變化在晚期肺癌更常見，有可能是癌癥復發的危險因子。

目前對TTF1基因的研究都采用高通量基因芯片技術，而這一方法多用于科研方面，不適應臨床應用，特別是個性化的應用在我國現階段條件尚不成熟。根據現有的文獻資料及查新報告TTF1基因的檢測技術未見報道，而用抗原抗體(ELISA)方法檢測TTF1蛋白也還處于研發階段。

原位雜交技術(in?situ?hybridization)是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

中國專利文獻CN1556221公開了“IC53基因及其相關產物診斷和治療結腸癌的用途及一種診斷結腸癌的試劑盒”。中國專利文獻CN1769485公開了“櫛孔扇貝病原類立克次氏體的原位雜交檢測方法及其試劑盒”。中國專利文獻CN1556410公開了“一種魚類病毒的檢測試劑盒及其檢測方法”。中國專利文獻CN1680597公開了“一種用于定量檢測丙型肝炎病毒(HCV)的熒光定量PCR試劑盒”。中國專利文獻CN2918435，公開了“一種檢測肥胖相關基因SNP的寡核苷酸芯片及試劑盒”。但是，關于TTF1基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測技術未見報道。

【發明內容】

本發明所要解決的技術問題是，提供一種TTF1基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用，能夠檢測肺癌狀況。