[發明專利]人源重建鼠模型及其應用

無效

• 申請號: 200810041842.6
• 申請日: 2008-08-19
• 公開（公告）號: CN101653377A
• 公開（公告）日: 2010-02-24
• 發明（設計）人: 劉枚華;王焱
• 申請（專利權）人: 杭州萬明生物科技有限公司
• 主分類號: A61B19/00
• 分類號: A61B19/00;A61K49/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 張 睿

技術領域

本發明涉及組織工程移植物或其材料的免疫原性，尤其涉及一種人源重建鼠模型及其在檢測組織工程移植物或其材料的免疫原性中的應用。

背景技術

干細胞具有自我更新和多向分化性，再生醫學與組織工程也嘗試運用干細胞來構建修復缺損病變的組織與器官，因此需要充沛、穩定、安全的種子細胞來源。

胚胎干細胞具有的全能分化特性給再生醫學帶來了曙光，但是胚胎干細胞由于倫理學的限制使得來源有限，而且由于潛在致瘤性以及調控機制的尚未明了，使得應用也受到很大的限制。成體干細胞作為一種新的干細胞來源，也具有多向分化的特性并且來源廣泛，文獻報道在人體的幾乎所有器官都發現并分離了干細胞。無疑成體干細胞是具有巨大臨床應用潛能的種子細胞。

目前異體成體干細胞作為組織工程的種子細胞已經成為世界各國的研究熱點。但是對于人的異體干細胞的免疫原性研究多停留在體外實驗，體內研究較少。原因在于動物模型不完善，而對于臨床應用，確定人體來源細胞或者組織在體內是否激發免疫應答，更為重要的依賴于基于動物模型的體內(in?vivo)實驗。

因此，本領域迫切需要提供一種可以檢測來自異體的干細胞作為種子細胞構建的組織工程移植物的免疫原性的動物模型，以及相應的檢測方法。

發明內容

本發明旨在提供一種建立人源重建鼠的方法。

本發明的另一個目的是提供一種檢測組織工程移植物的免疫原性的方法。

在本發明的第一方面，提供了一種建立人源重建鼠的方法，所述的方法包括步驟：給免疫缺失的鼠施用人外周血單個核細胞(PBMC)。

在另一優選例中，所述的免疫缺失的鼠是非肥胖型糖尿病鼠與重癥聯合免疫缺陷鼠反交鼠(NOD-SCID)。

在另一優選例中，施用40-200×10⁶個人外周血單個核細胞。

在另一優選例中，施用60-150×10⁶個人外周血單個核細胞。

在另一優選例中，通過腹腔注射施用人外周血單個核細胞。

在本發明的第二方面，提供了一種檢測組織工程移植物的免疫原性的方法，所述的方法包括步驟：

(a)將人外周血單個核細胞施用于免疫缺失的鼠，得到人源重建鼠；

(b)給予該人源重建鼠組織工程移植物；和

(c)檢測該人源重建鼠的體液和/或細胞免疫水平。

在另一優選例中，所述的組織工程移植物的種子細胞為人骨髓基質干細胞和/或人成體干細胞；更佳地，來自于異體的人骨髓基質干細胞和/或人成體干細胞。

在另一優選例中，所述的免疫缺失的鼠是非肥胖型糖尿病鼠與重癥聯合免疫缺陷鼠反交鼠(NOD-SCID)。

在另一優選例中，施用40-200×10⁶個人外周血單個核細胞；更佳地，施用60-150×10⁶個人外周血單個核細胞。

在另一優選例中，通過腹腔注射施用人外周血單個核細胞。

據此，本發明提供了一種可以檢測來自異體的干細胞作為種子細胞構建的組織工程移植物的免疫原性的動物模型，以及相應的檢測方法。

附圖說明

圖1顯示了NOD-SCID鼠體液及細胞免疫水平檢測的結果；其中，

A為NOD-SCID鼠血清IgG水平，B為NOD-SCID鼠脾臟細胞CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺數量比與C57的比較。

圖2顯示了人源化NOD-SCID鼠體內觀察人-CD4+、人-CD8+的變化情況；其中，

A為人源化鼠外周血及脾臟CD4/CD8數量比例，B為人源化鼠外周血及脾臟流式。

圖3顯示了人源鼠植入皮膚局部炎性細胞明顯浸潤的情況；其中，

A為1周取材的情況，B為4周取材的情況。

圖4顯示了利用人源化NOD-SCID小鼠體內植入各種材料后的的病理檢查結果；其中

A中的箭頭所示炎性細胞浸潤的情況，A1是細胞加材料植入一周的情況，A2是細胞加材料植入四周的情況；B、C中箭頭是細胞與材料骨架，B是材料植入一周的情況，C是硅膠(材料)植入四周的情況。

具體實施方式

發明人經過廣泛而深入的研究，發現將PBMC施用于NOD-SCID鼠可以建立人源化NOD-SCID小鼠，通過該人源化NOD-SCID小鼠可以檢測組織工程移植物的免疫原性，尤其是可以對將來自于異體的干細胞作為種子細胞的移植物進行其免疫原性的體內評估，從而為其進一步的臨床應用奠定基礎。