[發明專利]日本血吸蟲重組多表位抗原及其表達、純化方法與應用

無效

• 申請號: 200810040382.5
• 申請日: 2008-07-09
• 公開（公告）號: CN101624422A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 林矯矯;傅志強;章登吉;周偉芳;陸珂;石耀軍;劉金明;李浩;朱傳剛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;A61K48/00;A61P33/12;G01N33/68
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王 巍

技術領域

本發明涉及生物基因，具體涉及日本血吸蟲重組多表位抗原及其表達、純化方法 與在制備日本血吸蟲病免疫預防疫苗和診斷試劑中的應用。

背景技術

日本血吸蟲病是一種重要的人獸共患寄生蟲病。由于中間宿主釘螺難以消滅及血 吸蟲重復感染現象嚴重，單靠藥物治療不能控制血吸蟲病流行和最終消滅血吸蟲病， 因此抗血吸蟲病疫苗研究已經成為血防科研工作的重點之一。至今已有上百個血吸蟲 抗原基因被克隆和鑒定，不少于30種血吸蟲基因重組抗原疫苗和核酸疫苗用于動物 免疫保護試驗，一些基因工程苗也取得了一定的保護效果。但由于血吸蟲蟲體大，抗 原性復雜，單一抗原誘導的保護效果不夠理想。

表位(epitope)又稱抗原決定簇，是指決定某抗原物質抗原特異性的化學基團。 T細胞和B細胞表面均存在特異性抗原受體，能識別相應的抗原表位，根據表位設計 疫苗，包括合成肽疫苗、多價基因工程疫苗及表位核酸疫苗，是疫苗設計的一種新途 徑。抗原的加工就是天然蛋白質抗原在細胞內經過蛋白酶水解，轉變成和組織相容性 復合物(MHC)分子相結合的肽段的過程，加工后的抗原被轉送至細胞表面以抗原肽 -MHC相結合的形式進入三元體被免疫細胞識別，被稱為抗原呈遞。依照抗原加工呈 遞原理可以人工預測、篩選抗原表位，而且研究人員已經根據此原理設計了計算機應 用程序和數據庫來預測抗原加工呈遞過程并進行抗原表位篩選，構建多表位基因工程 抗原疫苗或核酸疫苗，期望其可增強單一抗原的免疫原性，并誘導更高的免疫保護效 果。表位是疫苗設計和免疫識別的基礎，因此，加強日本血吸蟲抗原表位研究，利用 重組多表位抗原進行聯合免疫或設計含多個表位的基因工程重組抗原疫苗或核酸疫 苗，是一條值得探索的提高疫苗保護力的途徑。

日本血吸蟲病診斷方法主要有病原診斷和免疫診斷兩種。牛、羊等大家畜的病原 診斷方法目前應用較多的是尼龍篩淘洗集卵結合糞便毛蚴孵化法，該法結果可靠，但 檢出率低、花費的時間較長。現有的家畜血吸蟲病血清學診斷方法的應用提高了診斷 方法的敏感性，但特異性、重復性等還不夠穩定。應用現代生物技術，尋找更為理想 的診斷抗原，對提高血清學診斷方法的敏感性、特異性將有很大的幫助。

本發明應用生物信息學方法和基因工程技術研制的重組多價核酸疫苗 pCMV-BSjGCP-BSj23、pCMV-BSjGCP-BSj23-BSj28和重組多表位抗原 pGEX-BSjGCP-BSj23、pGEX-BSjGCP-BSj23-BSj28在小鼠免疫實驗中獲得了較好的免 疫保護效果，重組多表位抗原在牛日本血吸蟲病診斷中具有較高的敏感性和特異性， 表明該種多表位重組抗原和核酸疫苗的研制方法及其產物具有較高的應用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于研究設計日本血吸蟲重組多表位抗原的表達和 純化以及在制備日本血吸蟲病免疫預防疫苗和診斷試劑中的應用。

本發明提供了一種日本血吸蟲重組多表位抗原。

所述日本血吸蟲重組多表位抗原編碼核苷酸片段具有如下核酸序列和相應的蛋白序 列：

1)BSjGCP-BSj23核酸序列：(見序列表SEQ?ID?4)

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BSjGCP-BSj23蛋白序列：(見序列表SEQ?ID?9)