[發明專利]鈉磷轉運體DvSPT2基因誘導型啟動子、其克隆方法及其應用

無效

• 申請號: 200810040039.0
• 申請日: 2008-07-01
• 公開（公告）號: CN101302525A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 許政暟;宋任濤;厲高慜;張文文;盧彬;孟祥宗;管禎瑋
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/10
• 代理公司: 上海上大專利事務所（普通合伙）
• 代理人: 何文欣

1.一種鈉磷轉運體DvSPT2基因誘導型啟動子，其特征在于該基因具有下列核苷酸序列之一：

(1).具有SEQ?NO?1所示的DNA序列；

(2).與序列表中序列1限定的核酸序列具有95％以上的同源性，且編碼相同功能蛋白質的DNA序列。

2.一種根據權利要求1所述的鈉磷轉運體DvSPT2基因誘導型啟動子的克隆方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

a.根據NCBI?GenBank上DvSPT2的cDNA序列，即DQ286761，設計引物，引物的序列如下：

5′-AGAACCTGAGCGGCTTCATC-3′

5′-CACGCAGCAATGAAGGAGGT-3′

通過四維PCR篩選體系從鹽藻基因組BAC文庫得到一個含有鹽藻鈉磷共轉運通道2號基因DvSPT2的BAC克隆，并構建該BAC克隆的鳥槍文庫；

b.大通量提取鳥槍文庫的質粒DNA，在MegaBACE?4500上進行序列的測定，每個鳥槍質粒利用M13正反向引物，進行雙向測序；

c.在RedHat?Linux平臺的并聯計算機群中，使用Phred/Phrap/Consed程序拼接所測序列，得到若干長短不一的重疊群Contig；使用PCR方法填補測序“溝”，使用細菌轉座子Kit填補物理“溝”，最后拼接得到一段連續的全長為64776bp的鹽藻基因組序列，DvSPT2基因組序列的啟動子和上游調控序列也一并獲得，以開放讀碼框第一位堿基為基準，向5′上游方向劃定1500bp，即為鈉磷轉運體DvSPT2基因誘導型啟動子。

3.一種根據權利要求1所述的鈉磷轉運體DvSPT2基因誘導型啟動子在鹽脅迫以及磷缺乏條件下的基因調控中的應用。