[發(fā)明專利]抗衰老能力遺傳檢測(cè)試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810039268.0
• 申請(qǐng)日: 2008-06-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101608226A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮哲民;鄒祖燁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海主健生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種檢測(cè)個(gè)體抗衰老能力遺傳易感性的試劑盒，通過(guò)同時(shí)檢測(cè)與抗衰老能力密切相關(guān)的內(nèi)皮型一氧化氮合成酶基因(NOS3)、胞外過(guò)氧化物歧化酶基因(SOD3)上的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型來(lái)評(píng)估個(gè)體抗衰老能力遺傳易感性。

背景技術(shù)

衰老是指機(jī)體成熟后已高度分化的系統(tǒng)走向組織紊亂以及趨異分化的過(guò)程，是許多因素共同作用的結(jié)果。主要表現(xiàn)為各組織器官的退行性變化，包括：組織失水、皮膚發(fā)皺、骨骼變脆、眼球水晶體物理性質(zhì)改變，以及動(dòng)脈硬化等等。

衰老不僅影響個(gè)人的容貌，而且更主要的是會(huì)帶來(lái)許多并發(fā)癥，如心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等疾病，嚴(yán)重危害人體健康和影響生活質(zhì)量。隨著世界人口老齡化程度的不斷加深，衰老問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)峻，據(jù)統(tǒng)計(jì)年齡超過(guò)65歲的人平均患有6種與衰老相關(guān)的疾病。

不同的人出現(xiàn)衰老癥狀的時(shí)間早晚不同，這主要是由于他們具有不同的抗衰老能力。抗衰老能力的大小主要由環(huán)境和遺傳因素共同決定。遺傳基因雖不可改變，但是及早獲知自身在遺傳基因上存在的患病風(fēng)險(xiǎn)，可以幫助高遺傳風(fēng)險(xiǎn)人群提高重視程度，積極改變自身的飲食和生活方式，從而達(dá)到延緩衰老的目的。

NOS3基因編碼的內(nèi)皮型一氧化氮合成酶主要分布于冠狀血管及心臟的內(nèi)膜，主要功能是參與精氨酸和脯氨酸代謝，并催化生成一氧化氮(NO)。NO具有舒張血管、降低血壓、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖等作用。當(dāng)攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)，引起NOS3基因編碼的蛋白功能受損，心臟及血管中一氧化氮含量降低，易導(dǎo)致機(jī)體抗衰老能力下降。

SOD3是SOD同工酶的一種，與其它SOD同工酶一樣，可以消除體內(nèi)代謝產(chǎn)生的反應(yīng)氧族，抵御內(nèi)外環(huán)境中超氧離子的損傷，屬于銅鋅SOD。作為唯一可在胞外表達(dá)的SOD，其在血管系統(tǒng)抵御氧自由基所造成的損傷方面起到重要作用，并且能促進(jìn)一氧化氮活性作用的發(fā)揮。當(dāng)攜帶風(fēng)險(xiǎn)基因型時(shí)，引起與肝磷脂的結(jié)合能力下降，使得SOD3從組織間隙釋放入血管的速度增加，在血漿中的濃度增加10倍，從而改變了SOD3在體內(nèi)的分布，組織中的自由基不能及時(shí)清除，易導(dǎo)致機(jī)體抗衰老能力下降。

發(fā)明內(nèi)容

基于內(nèi)皮型一氧化氮合成酶基因(NOS3)、胞外過(guò)氧化物歧化酶基因(SOD3)上的2個(gè)SNP位點(diǎn)多態(tài)性可用來(lái)評(píng)估個(gè)體抗衰老能力遺傳易感性的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供一種檢測(cè)個(gè)體抗衰老能力遺傳易感性的試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測(cè)NOS3基因上G894T?SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針對(duì)；

檢測(cè)SOD3基因上C760G?SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針對(duì)；

熒光定量PCR反應(yīng)組件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反應(yīng)緩沖液、去離子水等)。

本試劑盒中所述的引物對(duì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠輕易完成設(shè)計(jì)的，并可用常規(guī)的合成技術(shù)進(jìn)行合成。

本試劑盒中所述的特異性熒光探針對(duì)是能夠輕易完成設(shè)計(jì)的，特異性熒光探針對(duì)可用常規(guī)的探針合成技術(shù)進(jìn)行合成。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

10X熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液2μl，

25mM?dNTP混合液0.2μl，

25mM?MgCl2溶液1.2μl，

5units/μl?Taq?DNA聚合酶0.05μl，

20μM特異性引物對(duì)?每條引物各0.225μl，

10μM特異性熒光探針對(duì)?每條探針各0.25μl，

去離子水10.65μl。

本試劑盒供一人份檢測(cè)應(yīng)用，試劑盒的保存溫度為-20℃。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。

實(shí)施例1.檢測(cè)試劑盒的使用

步驟1：DNA模板的抽取

用硅膠吸附法抽提口腔上皮細(xì)胞的基因組DNA。

步驟2：熒光定量PCR反應(yīng)

使用檢測(cè)試劑盒中的熒光定量PCR套裝，分別進(jìn)行2次獨(dú)立的熒光定量PCR反應(yīng)，每個(gè)反應(yīng)的體系為總體積10μl，包含濃度為20ng/μl的DNA模板2μl、1μl?10X熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、0.1μl?25mM?dNTP混合液、0.6μl?25mM?MgCl₂溶液、0.025μl(5units/μl)Taq?DNA聚合酶、20μM的有義引物和反義引物各0.225μl、10μM的帶VIC熒光探針和帶FAM熒光探針各0.25μl，去離子水5.325μl。