[發明專利]一種高效液相色譜法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法

無效

• 申請號: 200810038660.3
• 申請日: 2008-06-06
• 公開（公告）號: CN101290308A
• 公開（公告）日: 2008-10-22
• 發明（設計）人: 朱利民;鄭妍;權靜;蔣波
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: G01N30/50
• 分類號: G01N30/50;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

技術領域

本發明屬色譜分離領域，特別是涉及一種高效液相色譜法(HPLC)分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法。

背景技術

阿魏酸丁酸甘油酯是天然酚酸類物質阿魏酸(Ferulic?acid)的衍生物，它是阿魏酸乙酯與三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)通過轉酯反應生成的阿魏酸單丁酸甘油酯、阿魏酸雙丁酸甘油酯及阿魏酸甘油酯的混合物，它們都具有阿魏酸與丁酸諸多的生理活性，同時克服了由于其烷烴鏈短而無法在油脂工業中應用的弊端，因而可以在食品、藥品及化妝品行業得到廣泛的應用。將脂溶性較強的三丁酸甘油酯和水溶性較強的阿魏酸乙酯合成阿魏酸丁酸甘油酯，不僅可以達到相互保護，降低氧化變性水平，提高它們的化學穩定性，而且還可以通過新型的雙功能分子達到彼此增強原有療效的雙重目的。然而由于其反應過程難以控制，且生成的混合物極性相似，甚至存在同分異構體的現象，在分析分離的過程中難以找到合適的分離條件，給研究者帶來了極大的困擾，并阻礙了對這些化合物性質的研究。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種高效液相色譜(HPLC)法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，該方法快速，高效，準確，便于工業應用分析。

本發明的一種高效液相色譜(HPLC)法分離分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法，包括：

(1)預處理：

在亞硫酰氯SOCl₂(3mL)催化下，阿魏酸(1-5g)與無水乙醇(10-50mL)于60-80℃溫度下回流加熱反應后，溶于乙醚(10-30mL)，飽和碳酸氫鈉萃取，室溫靜止析出結晶，得阿魏酸乙酯；

在30～50℃溫度下，以5mL叔丁醇為反應介質，將1～2.0mmoL純化的阿魏酸乙酯、2～4.0mmoL丁酸甘油酯和100～150mg?Novozym435脂肪酶，在搖床轉速150-210rpm，空氣浴振蕩反應80～120h，再經后處理，得到不同形式阿魏酸丁酸甘油酯；

取上述阿魏酸丁酸甘油酯1mg溶于1mL甲醇，通過0.45μm孔徑的微孔濾膜過濾后，再取10μL，用HPLC級甲醇稀釋至1mL，待用；

(2)分離分析：

采用的色譜柱(Ph-3?column?Inertsil，ID×250mm)，柱溫為室溫。固定相采用硅膠填料，紫外檢測波長為280～325nm；

流動相為甲醇與水的梯度混合，梯度洗脫程序：0-5min內保持50％甲醇，5-15min內甲醇濃度從50％逐漸變成100％，保持10min；

進樣量5μL，流速1mL/min。

所述的步驟(1)中阿魏酸乙酯與丁酸甘油酯、叔丁醇的體積用量比為1∶x∶5，x＝1-3。

所述的步驟(1)中后處理是通過過濾除去脂肪酶，旋轉蒸發除去反應介質，用體積比為4∶1的無水乙醚/正已烷抽提未反應的三丁酸甘油酯，氮氣吹掃除去反應體系殘余的有機介質。

所述的步驟(2)中所述的步驟(2)中紫外檢測波長為325nm。

所述的步驟(2)中固定相采用苯基inertsil?ph-3鍵合的硅膠填料。

本發明利用高效液相色譜法對阿魏酸丁酸甘油酯進行分離分析，根據待分離物質的性質選擇色譜柱填料和特定紫外掃描波長，利用阿魏酸在325nm處有紫外吸收，而此波長處對其它物質沒有紫外吸收，且能與特定苯基(inertsil?ph-3)鍵合的硅膠柱有緊密結合的特點，達到快速準確分離混合物的目的。

有益效果

(1)本發明方法大大簡化物質的分離純化步驟，減少實驗次數，快速、高效；

(2)與傳統方法相比較，高效液相色譜與特殊填料的苯基柱聯用分析方法簡單快捷，適合工業化生產中定性定量分析時間，可以應用于酚酸類衍生物的分離純化過程。

附圖說明

圖1為本發明高效液相色譜法對阿魏酸丁酸甘油酯的分離純化圖；

圖2為傳統高效液相色譜法對阿魏酸丁酸甘油酯的分離純化圖；

圖3為制備阿魏酸丁酸甘油酯的反應流程圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

實施例1

1.阿魏酸丁酸甘油酯的制備

酶催化反應在25mL的具塞三角瓶中，加入1.0mmoL阿魏酸乙酯，3.0mmoL丁酸甘油