[發明專利]一種用于海洋灰綠曲霉生產新型抗腫瘤活性化合物的新型培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 200810038598.8
• 申請日: 2008-06-05
• 公開（公告）號: CN101285038A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 周祥山;蔡孟浩;張元興;孫學謙;陶可敬;范衛民;陸健;顧謙群;朱天驕
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/26;G01N30/36;C12R1/66
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 王潔

1.?一種用于海洋灰綠曲霉生產新型抗腫瘤活性化合物的新型培養基，其特征在于，每升所述新型培養基包括：可溶性淀粉20～100g，蔗糖10～100g，麥芽糖20～100g，蛋白胨0.5-6g，酵母膏0.3-6g，黃豆粉0.2-4g，谷氨酸鈉0.5-10g，七水硫酸鎂0.01-1g，磷酸二氫鉀0.01-2g，其余為人工海水。

2.?根據權利要求1所述的新型培養基，其特征在于，所述可溶性淀粉40g，蔗糖40g，麥芽糖30g，蛋白胨2g，酵母膏1.07g，黃豆粉1g，谷氨酸鈉2g，七水硫酸鎂0.03g，磷酸二氫鉀0.05g。

3.?根據權利要求1所述的新型培養基，其特征在于，每升所述人工海水包括：氯化鈉24.5g，無水硫酸鈉3.92g，無水氯化鈣0.91g，六水氯化鎂4.98g，硼酸0.026g，氯化鉀0.664g，溴化鉀0.096g，碳酸氫鈉0.192g，其余為去離子水。

4.?一種用于制備根據權利要求1所述的新型培養基的方法，其特征在于，包括步驟：

a.所述可溶性淀粉用部分所述人工海水進行糊化，冷卻；

b.所述蔗糖，所述麥芽糖，所述蛋白胨，所述酵母膏，所述黃豆粉，所述谷氨酸鈉，

所述七水硫酸鎂和所述磷酸二氫鉀溶于部分所述人工海水；

c.將上述兩步驟得到的溶液混合均勻，用所述人工海水定容。

5.?根據權利要求4所述的方法，其特征在于，在步驟a中，所述糊化為用部分所述人工海水將所述可溶性淀粉制成懸濁液，然后緩慢倒入90-100℃的人工海水中并不斷攪拌，至成半透明狀液體。

6.?根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟c進一步包括：在121℃，滅菌20～40min。

7.?一種使用根據權利要求1所述的新型培養基培養海洋灰綠曲霉HB1-19生產灰綠霉素A的發酵方法，其特征在于，包括步驟：取海洋灰綠曲霉HB1-19孢子接種所述新型培養基進行培養，獲得新鮮接種液，取所述新鮮接種液按10～15％的接種量接入新鮮的所述新型培養基進行發酵培養6-9天，獲得發酵液。

8.?根據權利要求7所述的發酵方法，其特征在于，按終濃度約1～10*10⁷個所述海洋灰綠曲霉HB1-19孢子/ml進行接種；所述培養是在28℃，170r/min搖床培養30～60h。

9.?一種根據權利要求7所述的發酵方法生產的灰綠霉素A的檢測方法，其特征在于，包括步驟：待所述發酵液pH變至7.0左右或所述發酵液變紫黑色后約30h，停止培養；取適量所述發酵液，加入乙酸乙酯和玻璃珠進行萃取，離心，取適量有機相進行旋轉蒸餾；餾干物用無水甲醇溶解，離心；取適量上層液，用無水甲醇稀釋若干倍后，用HPLC測定灰綠霉素A含量，進而換算成所述發酵液中灰綠霉素含量。

10.?根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述發酵液取10ml，所述乙酸乙酯20ml，所述玻璃珠20粒；所述萃取在20℃和200r/min條件下進行。