[發明專利]一種與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233及其應用

無效

• 申請號: 200810037700.2
• 申請日: 2008-05-20
• 公開（公告）號: CN101280011A
• 公開（公告）日: 2008-10-08
• 發明（設計）人: 文鐵橋;顧知立;俞淑;謝江
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435
• 代理公司: 上海上大專利事務所
• 代理人: 何文欣

技術領域

本專利涉及一種與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233及其應用。

發明背景

帕金森病(Parkinson’s?disease，PD)是一種常見的老年性進行性神經系統變性疾病，在60歲以上人群中的發病率為1-2％。臨床癥狀為靜止性震顫、肌肉強直、運動遲緩、平衡失調或震顫等，在病理學上主要表現為黑質致密部的多巴胺能神經元損失和Lewy小體聚集物的形成，到目前為止沒有很好的治療方法，只能針對性的用藥如左旋多巴等來緩解癥狀。

果蠅已成為研究諸如帕金森病之類的神經系統變性疾病的一種重要模式生物。利用UAS/GAL4系統，已經能夠較為容易的實現基因的異位表達從而構建果蠅的帕金森病模型。蛋白質組學以及生物信息學的迅速發展，雙向電泳之類的高新技術手段在實驗室中運用，給予了我們從一個整體的，蛋白的角度研究帕金森病分子發病機制的良好平臺。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種與帕金森病相關蛋白CG223。

本發明的目的之二在于提供了與帕金森病相關蛋白CG223在內質網到高爾基體囊泡介導的蛋白轉運中的應用。

本發明的目的之三在于提供了與帕金森病相關蛋白CG223在細胞內的蛋白轉運中的應用。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233。

一種上述與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233在內質網到高爾基體囊泡介導的蛋白轉運中的應用。

一種上述與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233在細胞內的蛋白轉運中的應用。

我們通過在果蠅腦部特異性人源alpha-synclein?A53T，構建了確為可靠的果蠅帕金森病模型。然后通過腦部全蛋白雙向電泳及質譜鑒定，找出了發病組和對照組果蠅腦部的差異表達蛋白。為了更好的研究這些蛋白之間的關系，我們使用了生物信息學的手段分別構成了人源和果蠅源這些蛋白質相互作用網絡，從而更透徹的了解了PD發病的分子機制。

附圖說明

圖1為果蠅PD模型二維電泳圖，圖中標示出點所有差異點，其中C297，C342，C389為與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233的3種異構體。

圖2為與帕金森病相關的果蠅源蛋白CG2233的質譜分析報告。

圖3為果蠅帕金森病相關蛋白網絡圖，圖中正方形表示的點為質譜測試所得的差異蛋白點，左下角三角形表示的蛋白點為CG2233。

圖4為人類帕金森病相關蛋白網絡圖，圖中正方形表示的點為質譜測試所得的差異蛋白點，右下角八邊形表示的蛋白點為人類α-synuclein，左下角三角形表示的蛋白點為CG2233在人類中的功能對應點O95487。

具體實施方式

實施例一：果蠅帕金森病模型與對照組的蛋白質組學分析發現了蛋白CG22331.果蠅帕金森病模型的構建：α-synuclein?A53T基因的在果蠅腦部異位表達可以利用在UAS/GAL4系統來實現。將UAS-syn?A53T品系果蠅與TH-GAL4品系果蠅進行雜交，收集F1代，構建了果蠅α-synuclein?A53T帕金森病模型。通過基因組PCR，realtimePCR，腦部免疫組化，以及行為學試驗(CounterCurrent?Assay)，我們驗證了此模型確實導致了果蠅腦部PPM1/2區域的多巴胺能神經元特異性降解，并且導致果蠅爬壁能力的降低。而多巴胺能神經元特異性降解以及運動障礙正是人類帕金森病的重要特點。

2.雙向電泳及質譜分析：我們采用了蛋白組學的研究手段對果蠅腦部全蛋白進行分析。實驗分為2組：表達α-synuclein?A53T的果蠅(羽化后19天)與CantonS果蠅(羽化后19天)，每組3個重復。上樣蛋白量為每塊膠40mg。

(1)采用ph3-10NL(24cm)膠條進行第一項等電聚焦，其運行參數設置為：

第一步Stp?100V??11:00hr(水化)

第二步Stp?500V??1:00hr(等電聚焦)

第三步Grd?1000V?1:00hr(等電聚焦)

第四步Grd?8000V?3:00hr(等電聚焦)

第五步Stp?8000V?36000Vhr(等電聚焦)

第六步Stp?500V??24hr(低電場維持)

(2)膠條進行平衡，其流程為：DTT平衡，碘乙酰胺平衡以及IPG膠條的轉移。

(3)進行單一濃度12.5％SDS-PAGE垂直電泳，電泳參數設定為：

溫度：25℃