[發明專利]一種環丙沙星免疫原的制備方法

無效

• 申請號: 200810037474.8
• 申請日: 2008-05-15
• 公開（公告）號: CN101445556A
• 公開（公告）日: 2009-06-03
• 發明（設計）人: 楊先樂;胡鯤;黃宣運;方偉;錢科蕾;姜有聲;邱軍強
• 申請（專利權）人: 上海水產大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;G01N33/53
• 代理公司: 上海智力專利商標事務所
• 代理人: 瞿承達

技術領域：

本實用新型涉及一種環丙沙星免疫原，特別是涉及一種環丙沙星免疫原的制備方法。

背景技術：

環丙沙星免疫原的制備通常要實施合成環丙沙星免疫原過程，然而，在合成環丙沙星免疫原過程中，現有的方法一般分兩個步驟進行偶聯合成，所化費的時間需要80小時左右，這樣，會使得合成環丙沙星免疫原過程延長，造成生產效率降低，產品成本增加，同時，對后續使用成本也隨著提高，另外，其偶聯比率一般僅在2-6左右。

發明內容：

本發明的目的是要提供一種改進的環丙沙星免疫原的制備方法，它不但能有效地制得環丙沙星免疫原，而且，操作過程簡單，生產效率高。

為了達到上述的目的本發明是這樣實現的：本發明的一種環丙沙星免疫原的制備方法操作如下，先將牛血清蛋白、環丙沙星、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽以摩爾比為1∶503∶10433的比例一一加入到磷酸緩沖液中，在室溫下反應2小時，接著將反應后的液體裝入透析袋內，再放入1L磷酸緩沖液中透析48小時，每24小時換液一次，最后收集透析袋內的液體，在-20℃預冷凍2小時，然后在-50℃下冷凍干燥，制成環丙沙星免疫原白色固體粉末。

所述的磷酸緩沖液是PH為5.0，含量為0.01mol/L的磷酸緩沖液。

所述的透析袋是半周長為22mm，截留分子量為14000的透析袋。

由于本發明改進了現有的環丙沙星免疫原的制備方法，在合成環丙沙星免疫原過程中，本發明采用碳二亞胺一步法，使用本發明的方法，合成過程只需要50小時左右，這樣使制備過程得到了簡化，大大節約了制備環丙沙星免疫原的時間，提高了生產效率，其效率可提高37.5％左右，并且，也降低了生產成本，另外，本發明制備的免疫原的偶聯比率在25-36之間，由此，為對提高環丙沙星藥物殘留酶聯免疫檢測方法的準確度和靈敏度有了可靠的保障，并且，還有利于普及推廣應用。

具體實施方式：

以下將對本發明的一種環丙沙星免疫原的制備方法作進一步的詳細描述。

具體步驟如下：

1、稱取8.5g的氯化鈉、2.85g磷酸氫二鈉、0.2g氯化鉀，0.27g磷酸二氫鉀加入950ml的蒸餾水，滴加鹽酸調節PH(酸堿度)至5.0，再加入50mL的蒸餾水，配置成1000mL，濃度為0.01mol/L的磷酸緩沖液；

2、在5ml的離心管中依次加入牛血清蛋8mg(0.12μmol)、環丙沙星20mg(60.4μmol)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽240mg(1251.9μmol)，再加入4mL的磷酸緩沖液(PH為5.0，含量為0.01mol/L)，在室溫下反應2小時；

3、將反應好的液體裝入透析袋(半周長22mm，截留分子量14000)內，再放入裝有1L磷酸緩沖液(PH為5.0，含量為0.01mol/L)的燒杯中，透析48小時，每24小時換液一次；

4、將透析好的液體，在-20℃預冷凍2小時，然后在-50℃下冷凍干燥，制得免疫原白色固體粉末。