[發明專利]一種人載脂蛋白AV單克隆抗體及其應用

無效

• 申請號: 200810037081.7
• 申請日: 2008-05-07
• 公開（公告）號: CN101575375A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發明（設計）人: 張濤;吳力軍;劉光耀;田方艷;趙水平;胡敏;彭道泉
• 申請（專利權）人: 湖南遠泰生物技術有限公司;中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/18;C12P21/08;G01N33/577
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體的說，涉及一種單克隆抗體，更具體地說，涉及一種人載脂蛋白AV單克隆抗體及其應用。

背景技術

載脂蛋白AV是2001年Pennacchio等發現的一種新的載脂蛋白，它位于ApoAIV下游-27kb的位置，與小鼠ApoAV和人類ApoAIV的堿基序列高度同源，其表達的蛋白質與相鄰基因產物ApoAIV也有高度的同源性，故命名為ApoAV。

根據研究顯示，ApoAV與血脂水平有關，特別是與甘油三酯水平密切相關，而甘油三酯是冠心病獨立的危險因素，載脂蛋白AV是目前為止發現的唯一與甘油三酯代謝有關的載脂蛋白。因此，制備ApoAV單克隆抗體，以用于測定人血清中ApoAV濃度，對于盡早篩選出冠心病高危人群并進行及時預防與早期治療具有重要意義。

而現在尚未見到有關于ApoAV單克隆抗體的報道。

發明內容

本發明的目的，在于提供一種人載脂蛋白AV的單克隆抗體，以用于測定人血清中ApoAV濃度。

本發明的第二個目的，在于提供所述人載脂蛋白AV的單克隆抗體的制備方法。

本發明的第三個目的，在于提供所述人載脂蛋白AV的單克隆抗體的應用。

本發明的第四個目的，在于提供用于一種人載脂蛋白AV的檢測產品。

本發明的第五個目的，在于提供一種可產生人載脂蛋白AV的單克隆抗體的融合細胞。

本發明的人載脂蛋白AV的單克隆抗體，通過將人載脂蛋白AV免疫小鼠，取免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合，然后培養融合細胞而獲得。

相應的，本發明的人載脂蛋白AV的單克隆抗體的制備方法包括以下步驟：

A、用人載脂蛋白AV免疫小鼠；

B、取小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合；

C、培養融合細胞以獲得人載脂蛋白AV的單克隆抗體。

本發明提供的人載脂蛋白AV單克隆抗體可用于檢測人載脂蛋白AV。

本發明的人載脂蛋白AV的檢測產品利用所述人載脂蛋白AV的單克隆抗體制備。

根據本發明，所述檢測產品可以是快速檢測產品，優選的，所述快速檢測產品為膠體金試紙條或ELISA試劑盒。

使用本發明提供的Apo?AV的單克隆抗體可用于檢測血清中的Apo?AV，使用Apo?AV單抗檢測ApoAV時，其線性檢測范圍大，血清中的ApoAI、ApoB和Lp(a)對檢測結果無影響，且檢測結果穩定性好；因此，可使用本發明提供的Apo?AV單克隆抗體制備相應的檢測產品，以測定人血清中ApoAV濃度，盡早篩選出冠心病高危人群并進行及時預防與早期治療。

附圖說明

圖1是PCR產物凝膠電泳結果，其中，泳道1為蛋白Marker(DL2000)，泳道2為PCR產物。

圖2是western?blot檢測Apo?AV的電泳結果，其中，泳道M為蛋白標準，泳道1為重組ApoAV蛋白，泳道2為原倍人血清標本。

圖3是重組ApoAV蛋白標準曲線。

圖4是人血清滴度曲線。

本發明所獲得的可產生人載脂蛋白AV的單克隆抗體的融合細胞AV2G1和AV1F1，已于2008年4月2日提交中國典型培養物保藏中心保藏，保藏號分別為CCTCC?NO：C200805和CCTCC?NO：C200804。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發明而非用于限定本發明的范圍。

下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如《分子克隆：實驗室手冊》(New?York：Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press，1989)中所述的條件進行。

在下述實施例中使用的樣本稀釋液配方為：1％BSA+0.1％Triton?X-100?0.1M?Tris?pH8.0。

在下述實施例中所有數據均采用SPSS?11.0統計軟件分析，正態性檢驗用Shapiro-Wilk，相關性分析用Spearman計算相關系數。

在下述實施例中，血清TG，TCHO，HDL-C及LDL-C的測定，均采用酶法在日立7170全自動分析儀上完成。

實施例1、抗原的制備