[發明專利]一種提高林可霉素產量的方法

無效

• 申請號: 200810037080.2
• 申請日: 2008-05-07
• 公開（公告）號: CN101265492A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 葉蕊芳;王倩;鄭黎;張曉彥
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12P19/64
• 分類號: C12P19/64;C12R1/565
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，涉及一種提高林可霉素產量的方法。

背景技術

林可霉素(Lincomycin，簡稱LCM)又稱潔霉素，對革蘭氏陽性菌有很好的作用， 它沒有交叉耐藥性而且本身的毒性較低，所以被廣泛應用于由革蘭氏陽性菌引起的疾病， 同時，對革蘭氏陰性菌亦有一定的抑制作用。林可霉素及其下游半合成產品稱為林可酰胺 類抗生素，林可酰胺類抗生素已成為臨床應用上主要的抗生素之一。

一般所說的林可霉素是指其A組份，它是由古柯葉液堿PHA(反式-N-甲基-4-正丙 基脯氨酸(PPL))和甲硫林可酰胺MTL(6-氨基-6，8-二脫氧-1-硫代-O-赤式-2-D-半乳糖吡 喃糖苷)兩部分通過肽鍵連接而成的抗生素。如圖1所示，林可霉素A的生物合成途徑分 為兩個分枝，兩個分枝分別生成丙基脯氨酸(PPL)和甲硫林可胺(MTL)，其中，丙基 脯氨酸的合成途徑如圖2所示。

國外研究發現，發酵過程中直接添加作為前體的丙基脯氨酸可以提高林可霉素A的產 量而相應減少林可霉素B的產量，但添加其它非前體氨基酸是否會提高林可霉素A的產 量則尚未有相關報道。

發明內容

本申請的發明人在研究提高林可霉素產量的過程中發現，向林可霉素的發酵培養基中 加入脯氨酸和/或丙氨酸，均能提高林可霉素的產量。

因此，本發明的目的在于，提供一種提高林可霉素產量的方法，該方法通過向林可霉 素的發酵培養基中加入脯氨酸和/或丙氨酸來實現。

根據本發明的一個優選實施例，脯氨酸和丙氨酸的最適添加量、最適添加時間分別為： 60-84h添加0.005-0.01％脯氨酸；0-12h添加0.005-0.01％丙氨酸。

使用本發明提供的方法，通過在發酵培養基中添加在林可霉素合成中不作為前體物質 的脯氨酸和/或丙氨酸，均可明顯提高林可霉素的產量。

附圖說明

圖1是林可霉素A的生物合成途徑。

圖2是丙基脯氨酸的生物合成途徑。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發 明而非用于限定本發明的范圍。

下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如《分子克隆：實驗 室手冊》(New?York：Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press，1989)中所述的條件或生產廠 商推薦的條件進行。

在本發明的下述實施例中，使用的林肯鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)已于2008 年04月25日提交位于武漢大學的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏號為 CCTCC?M?208064。

除特別說明外，以下實施例中所使用的％，‰均為重量比。

在本發明的實施例中，發酵培養基的配方為：0.8％(NH₄)₂SO₄，0.8％NaNO₃，0.5％ NaCl，0.02％K₂HPO₄，3％黃豆餅粉，0.2％玉米漿，0.8％CaCO₃，5％葡萄糖，pH7.0。

在本發明的實施例中，林可霉素的效價采用杯碟法進行檢測，中國藥典2005版(二 部)。

實施例1、添加脯氨酸對林可霉素生物合成的影響

1.1、脯氨酸的添加量對林可霉素生物合成的影響

配制林可霉素的發酵培養基，向培養基中分別加入重量比為0.001％、0.005％、0.01 ％、0.05％、0.1％、0.2％的脯氨酸，同時以不添加脯氨酸的培養基作為對照，接入林肯 鏈霉菌(Streptomyces?lincolnensis)發酵培養168小時后，取樣測定林可霉素的效價，結 果如表1所示。

表1、脯氨酸的添加量對林可霉素生物合成的影響