[發(fā)明專利]光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200810036596.5 | 申請日: | 2008-04-24 |
| 公開(公告)號: | CN101281137A | 公開(公告)日: | 2008-10-08 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 王海蛟;趙衛(wèi)國 | 申請(專利權(quán))人: | 博陽生物科技(上海)有限公司 |
| 主分類號: | G01N21/76 | 分類號: | G01N21/76;G01N21/63;G01N33/53 |
| 代理公司: | 上海光華專利事務(wù)所 | 代理人: | 許亦琳;余明偉 |
| 地址: | 201210上海市浦東新*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 激化 發(fā)光 免疫 檢測 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)。
背景技術(shù)
光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)是一種以高分子微粒為基礎(chǔ)的化學(xué)發(fā)光技術(shù),它可以通過感光微粒和發(fā)光微粒在一定距離范圍內(nèi)結(jié)合,產(chǎn)生離子氧能量傳遞,發(fā)出光信號,從而對待測樣品進行檢測。感光微粒是填充有感光化合物的高分子微粒,發(fā)光微粒是填充有發(fā)光化合物和鑭系元素的高分子微粒。光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)的核心原理是能量的近距離轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移的介質(zhì)是高能態(tài)的離子氧。當(dāng)紅色激光照射感光微粒后,釋放單線態(tài)氧離子(4μs),其傳播距離為200nm左右,只有當(dāng)感光微粒和發(fā)光微粒的距離足夠接近的情況下,感光微粒釋放的單線態(tài)氧離子才能到達發(fā)光微粒,從而產(chǎn)生一系列化學(xué)反應(yīng),發(fā)射出520~620nm高能級的光,由于反應(yīng)體系中,微粒的濃度很低,碰撞幾率非常小,因此本底信號微弱,只有感光微粒和發(fā)光微粒通過免疫反應(yīng)結(jié)合以后,才會發(fā)射出明顯的光,因此系統(tǒng)靈敏度很高。相對于傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫分析方法,它具有均相(免沖洗)、靈敏度高和操作簡便等特點,并且易于實現(xiàn)自動化,因此其應(yīng)用前景十分廣闊。
本發(fā)明正是針對以上技術(shù)原理進行了深入的研究,開發(fā)出了以上技術(shù)原理的應(yīng)用條件,確定了激發(fā)光最優(yōu)化激發(fā)功率及波長,發(fā)射光光源的最優(yōu)化檢測波長,發(fā)射光最優(yōu)化檢測延遲時間。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法,從多方面對其檢測條件進行優(yōu)化。
本發(fā)明公開了一種光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法,包括下列步驟:
a.以620-700nm的激發(fā)光照射含有發(fā)光微粒及感光微粒的反應(yīng)溶液;
b.檢測反應(yīng)溶液的發(fā)射光量,發(fā)射光的檢測波長為450-650nm。
上述步驟a以激發(fā)光照射反應(yīng)溶液到步驟b檢測反應(yīng)溶液發(fā)光量之間有一檢測延遲時間,其范圍為10ms-1000ms。
上述步驟a以激發(fā)光照射反應(yīng)溶液的時間為50ms-2000ms;優(yōu)選200ms-1800ms,激發(fā)最佳為500-1000ms。
較佳的,上述激發(fā)光的波長范圍為640-680nm,優(yōu)選660nm,發(fā)射光的檢測波長范圍為610-620nm,優(yōu)選615nm。
較佳的,激發(fā)光光源的功率范圍為5-100mw,優(yōu)選40-60mw。
上述發(fā)光微粒及感光微粒包被有抗原或抗體。
上述發(fā)光微粒是指填充有發(fā)光化合物和鑭系元素化合物的高分子微粒。發(fā)光化合物可以是Dioxene(二氧雜環(huán)己烯)或thioxene(二甲基噻吩)的衍生物等,鑭系元素化合物可以是Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen等,該微??捎墒袌錾腺彽谩0l(fā)光微粒的表面官能團可以是任何能聯(lián)接蛋白質(zhì)的基團,如羧基,醛基,胺基,環(huán)氧乙基或鹵代烷基等各種已知的可連接蛋白質(zhì)的官能團。
上述感光微粒是填充有感光化合物的高分子微粒,在紅色激光激發(fā)下,可以產(chǎn)生單線態(tài)氧離子。當(dāng)其與發(fā)光微粒距離足夠近的情況下,單線氧離子傳遞到發(fā)光微粒,與發(fā)光微粒中的發(fā)光化合物反應(yīng),產(chǎn)生紫外光,紫外光再進一步激發(fā)鑭系元素化合物,產(chǎn)生一定波長的光子。感光化合物可以是酞菁染料等,該微粒也可由市場上購得。
上述反應(yīng)溶液的溶劑可以是常規(guī)的適合抗原抗體反應(yīng)的溶劑體系,如HEPES緩沖體系或Tris緩沖體系。溶劑中還可添加起封閉和蛋白保護作用的物質(zhì)如BSA以及防止微粒聚集的穩(wěn)定試劑如Tween20,出于對試劑防腐以及長期儲存的考慮還可在溶劑中添加防腐劑,如慶大霉素和Proclin?300。
本發(fā)明的關(guān)鍵在于,經(jīng)過研究光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法中激發(fā)光、發(fā)射光、檢測時間等選擇條件,給出了相應(yīng)參數(shù)合適檢測的選擇范圍,及優(yōu)選的參數(shù)范圍,從而使得光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法的可控性更強,靈敏度及精確度得到進一步地提高。
上述光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法可以有多種應(yīng)用,如用于生物活性物質(zhì)的定性或定量檢測。在生物活性物質(zhì)定性或定量檢測中,可采用雙抗體夾心法。即可將發(fā)光微粒包被抗原或抗體,而后將待測抗體或抗原,與標(biāo)記蛋白(如生物素)標(biāo)記的抗原或抗體一起進行孵育反應(yīng),再與包被有抗標(biāo)記物(如親和素)的感光微粒混合孵育獲得反應(yīng)液,所謂抗標(biāo)記蛋白即為可與標(biāo)記蛋白特異性結(jié)合的蛋白,而后采用前述條件進行激發(fā)光照射并檢測發(fā)射光量,從而達到定性或定量檢測目的。反之亦可,即將感光微粒包被抗原或抗體,而后待測抗體或抗原,與標(biāo)記蛋白標(biāo)記的抗原或抗體一起進行孵育反應(yīng),再與包被有抗標(biāo)記蛋白的發(fā)光微粒混合孵育,而后采用前述條件進行激發(fā)光照射并檢測發(fā)射光量。
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- 專利分類
G01N 借助于測定材料的化學(xué)或物理性質(zhì)來測試或分析材料
G01N21-00 利用光學(xué)手段,即利用紅外光、可見光或紫外光來測試或分析材料
G01N21-01 .便于進行光學(xué)測試的裝置或儀器
G01N21-17 .入射光根據(jù)所測試的材料性質(zhì)而改變的系統(tǒng)
G01N21-62 .所測試的材料在其中被激發(fā),因之引起材料發(fā)光或入射光的波長發(fā)生變化的系統(tǒng)
G01N21-75 .材料在其中經(jīng)受化學(xué)反應(yīng)的系統(tǒng),測試反應(yīng)的進行或結(jié)果
G01N21-84 .專用于特殊應(yīng)用的系統(tǒng)
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