[發明專利]肌鈣蛋白Ⅰ血清快速檢測試劑盒(膠體金法)

無效

• 申請號: 200810036418.2
• 申請日: 2008-04-22
• 公開（公告）號: CN101566634A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發明（設計）人: 宣生良
• 申請（專利權）人: 上海一滴準生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.心肌鈣蛋白I(cTnI)的分子量為22.5KD，其連同肌鈣蛋白T和肌鈣蛋白C構成結構復合物，在心臟中的細胞間鈣信號肌動蛋白-肌球蛋白相互作用的轉化過程中起著重要作用，本試劑盒采用雙抗夾心免疫法，當標本加入樣品槽后，通過結合墊和金抗體結合，復合物沿膜流動和抗體在檢測區域反應。如果標本中存在有可檢出濃度或更濃的標志物，就會在檢測區出現一條色帶。如果沒有就會保持無色。標本繼續移動至控制區域，出現粉紅-玫瑰紅的色帶，說明試驗正常結果有效。

2.根據權利要求1所述的肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)，其特征在于：心肌鈣蛋白I(cTnI)的分子量為22.5KD，其連同肌鈣蛋白T和肌鈣蛋白C構成結構復合物。

3.根據權利要求1所述的肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)的配制，其特征在于：1％的檸檬酸三鈉，1％的氯金酸，0.01％的氯金酸，0.1ml/LK2CO3，10％的氯化鈉，1％的疊氮鈉，10％的BSA，1mol/l?PBS，0.05mol/lPBS，膠體金復溶液。

4.根據權利要求1所述的肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)，包括如下工藝步驟：

第一步cTnI標記用單克隆抗體的預處理

1.1透析(純化水，24小時)

1.2離心去上清(4~10℃，10000轉/分鐘、5分鐘)

1.3BCA法則濃度(物料平衡)

1.4PH的調節(0.1mol/LK2CO3量的確定)

1.5最佳標記量的確定

1.6分裝(5000人份量/支)、-20度凍存

第二步膠體金的制備

2.1量取0.01％的HAuCL4溶液(加熱至沸騰)

2.2迅速加入1％檸檬酸三鈉溶液，攪拌均勻

(比例：100ml?0.01％的HAuCL4溶液加1.6ml?1％檸檬酸三鈉溶液)(繼續加熱10分鐘)

2.3冷卻至室溫，用超純水恢復至原體積

2.40.22μm微孔濾膜過濾除菌

2.5送檢、裝瓶、貼標簽

第三步cTnI免疫金的制備和干燥

3.1cTnI標記抗體的稀釋

按照每生產5000人份4mm寬的cTnI試紙條需1支cTnI標記抗體計算，領取相應量的抗體，用0.05mol/l?PBS稀釋到0.5mg/ml。

3.2生產前小試：

取1ml膠體金

1)調PH(0.1mol/L?K2CO3的量，混勻5min)

2)根據生產指令加入CTnIAb1，混勻10min

3)加入100ul?10％BSA，混勻10min

4)離心1000轉/min，30min(要求環境溫度4-10℃)

5)30％復溶，浸泡聚酯膜0.8ml/條(0.6cm×30cm)

6)溫度20-30℃，相對濕度30-35％干燥5小時

7)送質檢部檢驗

3.3cTnI抗體標記

1)標記小試質檢質檢合格

2)取膠體金，電磁攪拌

(以生產1000人份5mm寬的肌鈣蛋白I膠體金試紙條約需50ml膠體金來計算。)

3)調PH(0.1mol/L?K2CO3的量)，混勻5min

4)根據最適標記量加入CTnIAb1，混勻10min

5)加入100ul?10％BSA，混勻10min

6)離心1000轉/min，30min，4-10℃

7)30％復溶，浸泡聚酯膜25.3ml/張(20cm×30cm)

8)溫度20-30℃，相對濕度30-35％干燥5小時

9)抽一條0.6cm寬送質檢部做膜金匹配檢測

10)cTnI免疫金送中間品室暫存

第四步cTnI包被板的制備

4.1包被抗體的稀釋

羊抗鼠Ig0.05mol/LPBS稀釋到1.2mg/ml工作濃度

cTnI捕獲抗體用0.05mol/LPBS稀釋到1.1mg/ml工作濃度

4.2包被前小試

1)各取20ul試包被1條20cm長的膜，線濃度1.0ul/cm

2)2℃-8℃過夜

3)貼膜

4)溫度20-30℃、相對濕度30-35％干燥5小時，送質檢部檢驗質檢合格。

4.3包被生產

1)cTnI包被小試質檢合格單

2)羊抗鼠IgG、cTnI捕獲抗體工作濃度包被質控線和檢測線，線濃度1.0ul/cm

3)2℃-8℃過夜

4)貼膜

5)溫度20-30℃、相對濕度30-35％干燥5小時

6)抽1板送質檢部作膜金匹配

7)密封后送中間品庫暫存