[發明專利]利用新型修飾玻碳電極同時測定多巴胺和抗壞血酸的方法

無效

• 申請號: 200810036372.4
• 申請日: 2008-04-21
• 公開（公告）號: CN101285793A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 丁亞平;曹曉妹;羅立強;李麗;邊瑞香;鄒雪蓮
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 上海上大專利事務所
• 代理人: 顧勇華

技術領域

本發明涉及一種利用殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶修飾玻碳電極同時測定多巴胺和抗壞血酸的方法，屬電化學分析檢測技術領域。

背景技術

電化學方法測定多巴胺(DA)引起了廣泛興趣，是由于它是重要的神經遞質，在運作的中樞神經，腎和內分泌系統中起著重要的作用。腦內多巴胺神經功能失調是精神分裂癥和帕金森病的重要原因。因此對其測定方法的研究，對探討其生里機理和相關疾病的診斷具有重要的意義。同樣的，抗壞血酸是人類飲食中的維生素，在用于治療感冒，精神病、不孕癥，癌癥、艾滋病起著重要的作用。因多巴胺和抗壞血酸在裸電極上高過電位和氧化峰相互重疊，而使其無法測定。如何能有電位選擇性地準確測定這兩種物質已成為電分析化學、生物和醫學研究領域的一個重要課題。目前對于多巴胺和抗壞血酸的測定方法有：化學發光法、液相色譜、分光光度法、熒光分析法、氣相色譜-質譜法連用、和毛細管電泳等。以上幾種對抗壞血酸和多巴胺的測定方法不便于攜帶，價格昂貴，操作復雜。

電化學測定方法因其速度快，成本低，靈敏度和準確度高等優點引起了人們的廣泛關注。而用電化學方法，因抗壞血酸和多巴胺的結構式相近，在裸電極和大多數固體電極上其氧化峰十分接近，由于其重疊的信號存在，同時測定它們成為一大難點，因而使其測定受到限制。電化學修飾電極能有效的降低某些物質氧化還原物質的過電位，從而達到分離和測定的目的。已有文獻報道：利用抗壞血酸和多巴胺相反的膠束效果，這兩種生物活性物質可在十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和十二烷基硫酸鈉(SDS)離子膠束中同時測定。利用陽離子表面活性劑(雙十二烷基溴化銨(DDAB)，和陰離子表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)直接修飾電極表面，同時測定抗壞血酸和多巴胺也有報道。但是上述方法中，用表面活性劑直接修飾電極容易脫落，因而制得的修飾電極的穩定性較差。殼聚糖由于其良好的生物兼容性，易成膜性和水不溶性，且原料易得。利用殼聚糖和表面活性劑混合可以形成穩定均勻的膜，可以克服單純使用表面活性劑脫落的問題，從一定程度上提高了電極的穩定性。至今沒有將殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶修飾玻碳電極用于同時測定抗壞血酸和多巴胺的文獻報道。

發明內容

本發明的目的在提供一種利用殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶修飾玻碳電極同時測定多巴胺和抗壞血酸的方法。

一種利用新型修飾玻碳電極同時測定多巴胺和抗壞血酸的方法，其特征在于具有如下的過程和步驟：

a.首先將玻碳電極在0.05μm?Al₂O₃拋光絨布上拋光至鏡面，然后依次在蒸餾水、稀硝酸溶液、無水乙醇及二次蒸餾水中超聲清洗預處理；

b.制備殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶復合修飾玻碳電極：在預處理好的玻碳電極上滴加殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶復合修飾劑；該修飾劑的配制方法是：首先配制溴化十乙烷基吡啶水溶液，其濃度為5～10mM/L；再配制殼聚糖水溶液，其重量百分比濃度為0.5～1.0％；然后將所述兩種修飾劑按一定體積比混合，兩者的體積比為：殼聚糖水溶液∶溴化十六烷基吡啶水溶液＝1∶1～1∶3；攪拌使混合均勻，得到復合修飾劑；

c.將一定量上述混合均勻的復合修飾劑滴在清洗干凈的玻碳電極基體表面上，并在室溫下晾干，隨后放入于pH＝4.7的磷酸鹽緩沖溶液中；然后在-0.2～0.8V的電位窗口中循環伏安法掃描至圖形穩定；再用二次蒸餾水沖洗干凈，即制得殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶修飾玻碳電極：

d.將上述修飾玻碳電極直接用于多巴胺和抗壞血酸的電化學測定；其測定方法如下：將殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶修飾玻碳電極作為工作電極，參比電極為飽和甘汞電極，輔助電極為鉑片電極，組成三電極系統；將該三電極系統置于含一定濃度的抗壞血酸和多巴胺及pH為4.7的磷酸鹽緩沖溶液中；電位從-0.2V至+0.8V循環伏安掃描數圈以活化電極，之后進行差示脈沖伏安法，并記錄I-E曲線；；在曲線圖2示出，在復合修飾玻碳電極上，抗壞血酸和多巴胺出現兩個獨立的尖峰，峰分辨率高，峰電位差達0.3V；實現了同時測定多巴胺和抗壞血酸。

本發明利用殼聚糖良好的生物相容性、良好的成膜性，以及和水不溶性，來固定陽離子表面活性劑溴化十六烷基吡啶于電極表面，從而增強了電極的穩定性。本發明的殼聚糖復合溴化十六烷基吡啶修飾劑能均勻分散在玻碳電極的表面，形成的修飾層比較穩定，有利于在磷酸鹽緩沖溶液中進行伏安測定。