[發明專利]番茄黃化曲葉病毒病的嫁接接種鑒定法

無效

• 申請號: 200810036124.X
• 申請日: 2008-04-16
• 公開（公告）號: CN101560571A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發明（設計）人: 萬延慧;朱為民;于力;朱龍英
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;A01G1/06
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 李浩東

技術領域

本發明涉及番茄黃化曲葉病毒病的接種法。

背景技術

番茄黃化曲葉病毒病是一由煙粉虱(Bemisia?tabaci)傳播的雙生病毒，隨著近年來煙粉虱的大發生，番茄黃化曲葉病毒病成逐年加重趨勢。因此，建立番茄黃化曲葉病毒病接種鑒定方法并對現有的品種或品系進行抗病性鑒定已經迫在眉睫。

目前，文獻：H.Delatte，H.Holota，B.Reynaud?and?J.Dintinger.Characterisation?of?a?quantitative?resistance?to?vector?transmission?of?Tomatoyellow?leaf?curl?virus?in?Lycopersicon?pimpinellifolium[J].European?Journal?ofPlant?Pathology(2006)114：245-253報道了一種采用煙粉虱(Bemisia?tabaci)接種鑒定法，但是，該方法存在一些明顯的缺陷：1、受煙粉虱的繁殖生長季節限制，由于煙粉虱多在夏秋季發生，冬春季煙粉虱很少，所以很難在冬春季進行煙粉虱接種鑒定。2、受煙粉虱發生地域的限制，由于煙粉虱多在我國的南方地區發生，因此在北方地區無法采用煙粉虱接種鑒定發。

發明內容

本發明的目的是提供一種番茄黃化曲葉病毒病的嫁接接種鑒定法，以克服現有技術存在的上述缺陷。

本發明的方法包括如下步驟：

(1)選取感染了黃化曲葉病毒病的番茄作砧木，對待鑒定的材料進行育苗，待兩片真葉時，采用斜切接法將其嫁接到感病砧木上，嫁接后的前5天，保持90～95％的濕度，溫度為20～25℃，遮光育苗，嫁接5天以后，在40～70％的濕度，溫度為25～30℃的條件下正常培養育苗；

對待鑒定的材料進行育苗期間，采用阿克泰防止煙粉虱的侵染；

術語“斜切接法”在文獻：紀偉鋒.番茄嫁接技術[J].西南科技大學學報.2005.01：68-69.中有詳細的描述；

(2)嫁接后的15～40天內，提取接穗的DNA，用PCR法檢測接穗中是否已經含有番茄黃化曲葉病毒病。

所述的PCR法為一種常規的方法，在文獻Zhang?Yongping，Zhu?weiminCuiHuimei.Molecular?identification?and?the?complete?nucleotide?sequence?ofTYLCV?isolate?from?Shanghai?of?China[J].Virus?Genes.DOI10.1007/s11262-008-0226-0.中有詳細的報道。

所說的番茄的品種選自2300或2583，可采用市售的產品；

本接種鑒定方法有以下優點：

能保證接種鑒定的準確性，接種鑒定方法簡單，可以一年四季或在沒有煙粉虱發生的地區采用嫁接法進行接種鑒定。

附圖說明

圖1為實施例1的嫁接15天后提取接穗DNA檢測番茄黃化曲葉病毒病圖片。

圖2為實施例1的嫁接30天后提取接穗DNA檢測番茄黃化曲葉病毒病圖片。

圖3為實施例2的嫁接15天后提取接穗DNA檢測番茄黃化曲葉病毒病圖片。

圖4為實施例2的嫁接30天后提取接穗DNA檢測番茄黃化曲葉病毒病圖片。

具體實施方式

實施例1

番茄的品種選自2300。

(1)選取感染了黃化曲葉病毒病的番茄作砧木，對待鑒定的材料進行育苗，待兩片真葉時，采用斜切接法將其嫁接到感病砧木上，嫁接后的前3天，保持90％的濕度，溫度為20℃，遮光育苗，嫁接5天以后，在50％的濕度，溫度為25℃的條件下正常培養育苗；

對待鑒定的材料進行育苗期間，采用阿克泰防止煙粉虱的侵染；

(2)嫁接后的15天，30天，分別提取接穗的DNA，用PCR法檢測接穗中是否已經含有番茄黃化曲葉病毒??；

具體的步驟如下：

接穗的DNA提取方法：

1.1.5ml離心管加入離心管蓋大小的新鮮葉片2片；

2.加入液氮，用尖頭玻棒輕輕研磨，然后加入250μl?CTAB混合均勻；

3.65℃水浴1h；

4.置于4℃冰箱或室溫冷卻至15℃以下；

5.加入250μl?24∶1氯仿/異戊醇，上下混勻5min，保證樣品和氯仿充分混合；

6.12000rpm離心10min；