[發(fā)明專利]一種用磁性納米顆粒固定β－葡萄糖苷酶的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810035950.2
• 申請(qǐng)日: 2008-04-11
• 公開（公告）號(hào): CN101270352A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱利民;薛勇;聶華麗;周毓婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東華大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/04
• 分類號(hào): C12N11/04
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所
• 代理人: 黃志達(dá);謝文凱

1.一種用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，包括：

(1)將0.1～1M的Fe²⁺和Fe³⁺的氯化物溶液以1∶2～2∶3的體積比混合后，用1～6M的NaOH溶液在80-90℃，pH8～10下高速攪拌進(jìn)行沉淀反應(yīng)制得大小8～10nm的Fe₃O₄顆粒；

(2)將1～2g殼聚糖溶解在100～200mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10～30％的醋酸溶液中，形成均一透明的膠體溶液，再將制備的Fe₃O₄顆粒加入，攪拌20～30min，得到磁性納米顆粒，用蒸餾水反復(fù)洗滌至中性，烘干待用；

(3)將制得的磁性納米顆粒加入到β-葡萄糖苷酶溶液中，經(jīng)吸附-交聯(lián)得到殼聚磁性納米顆粒固定化酶；

(4)分別在0.1～0.5g固定化β-葡萄糖苷酶和游離β-葡萄糖苷酶溶液中加入0.1～0.5MpH＝3.0～9.0的緩沖溶液，20℃～80℃調(diào)溫度后進(jìn)行反應(yīng)，每隔一周測(cè)定其酶活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(1)所述的Fe²⁺和Fe³⁺的氯化物溶液濃度為0.2～0.5M，NaOH溶液濃度為3～5M。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(2)所述的醋酸溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15～25％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(3)所述是采用體積分?jǐn)?shù)為25％的戊二醛溶液將β-葡萄糖苷酶溶液交聯(lián)在磁性納米顆粒上。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(3)所述的β-葡萄糖苷酶溶液的總酶活為5～10IU。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(4)所述的緩沖溶液是pH＝4.0～8.0的檸檬酸緩沖溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(4)所述的反應(yīng)溫度是30℃～70℃，反應(yīng)時(shí)間為10～20分鐘。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用磁性納米顆粒固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于：步驟(4)所述的每隔一周測(cè)定其酶活性是指測(cè)定其殘余酶活力，殘余酶活力以初始酶活力的相對(duì)百分?jǐn)?shù)表示。