[發(fā)明專利]利用重組大腸桿菌高效生產(chǎn)丙酮酸氧化酶的分批式補(bǔ)料發(fā)酵工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810035841.0
• 申請(qǐng)日: 2008-04-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101250507A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張嗣良;趙劼;王永紅;儲(chǔ)炬;莊英萍;袁中一
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/02
• 分類號(hào): C12N9/02;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 范征

1.一種發(fā)酵生產(chǎn)丙酮酸氧化酶的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(1)在37±1℃的培養(yǎng)溫度下，培養(yǎng)含有丙酮酸氧化酶表達(dá)盒的重組大腸桿菌，從而表達(dá)丙酮酸氧化酶；和

(2)當(dāng)所述的重組大腸桿菌初始生長(zhǎng)階段結(jié)束后，采用梯級(jí)降溫的方式將溫度由37±1℃降低到32±2℃，保持該溫度至發(fā)酵結(jié)束。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，當(dāng)所述的重組大腸桿菌初始生長(zhǎng)階段結(jié)束后，降溫1±0.2℃；之后每隔4±1小時(shí)降1±0.2℃，直至溫度為32±1℃后保持恒溫，至發(fā)酵結(jié)束。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，當(dāng)所述的重組大腸桿菌初始生長(zhǎng)階段結(jié)束后，降溫1℃；之后每隔4小時(shí)降1℃，直至溫度為32℃后保持恒溫，至發(fā)酵結(jié)束。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，當(dāng)所述的重組大腸桿菌初始生長(zhǎng)階段結(jié)束后，開(kāi)始補(bǔ)料。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的補(bǔ)料培養(yǎng)基含有：甘油20±5％，蛋白胨4±1％，酵母提取物3±1％，硫酸銨1±0.3％，磷酸鹽1.4±0.4％，微量元素母液0.125±0.03％。

6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，補(bǔ)料培養(yǎng)基的補(bǔ)料速率為0.2±0.1ml/min/L。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的重組大腸桿菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，培養(yǎng)含有丙酮酸氧化酶表達(dá)盒的重組大腸桿菌所用的初始培養(yǎng)基含有：

甘油6-18ml/L；蛋白胨12-20g/L；酵母提取物10-16g/L；硫酸銨3-7g/L；硫酸鎂1-4g/L；磷酸鹽4-8g/L；氯化鈉6-15g/L。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在重組大腸桿菌發(fā)酵過(guò)程中，以氨水控制pH在6.5-7.1。