[發明專利]泌尿生殖道支原體培養基及檢測方法

無效

• 申請號: 200810035705.1
• 申請日: 2008-04-08
• 公開（公告）號: CN101555457A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發明（設計）人: 顧偉鳴;吳磊;楊陽
• 申請（專利權）人: 上海市皮膚病性病醫院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及泌尿生殖道微生物培養及檢測方法，具體涉及泌尿生殖道解脲脲原體(Uu)和人型支原體(Mh)的培養基和檢測方法。

背景技術

支原體是目前所知能獨立生長，自行繁殖的最小微生物。它無細胞壁，分布廣泛，能在人工培養基上生長，但是營養條件要求高。它們與泌尿生殖道炎癥密切相關，還能引起免疫性疾病[支原體學，2008年第2版，41-44]。發病率高和致病性強的是解脲脲原體(Uu)和人型支原體(Mh)。它們與女性生殖道感染，如宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎以及一些并發癥如自然流產、胎膜早破、早產等有關。Uu還可吸付精子上，阻礙其運動，干擾精子與卵子結合，引起不孕；還是引起新生兒呼吸系統和中樞神經系統感染的病原體之一。2000年后，中國在其他傳染性疾病報告病例趨于穩定或下降背景下，NGU(非淋菌性尿道炎)報告病例依然呈快速上升趨勢，2004年2005年全國由Uu和Mh等微生物感染所引起的NGU占到七種性病之首，構成分別達35.94％和36.78％。2005年上海地區NGU發病率達到56.87/10萬[全國性病疫情分析報告，2006.20(2)：1-9]。發病形勢嚴峻。

檢測Uu和Mh的方法有免疫學檢測、核酸測定、分離培養等。支原體屬內不同種的支原體存在著交叉免疫反應，有些支原體還存在著異質性抗原，因此免疫性檢測方法目前應用受到限制[中華檢驗醫學雜志，2005，28(7)：677-678]。鑒于PCR檢測中存在的嚴重假陽性問題，中國衛生部頒布了規范性文件[衛醫發(2002)10]，對臨床應用此項技術開展實驗診斷的單位和部門，設定嚴格的準入條件。況且目前為止國內市場上還沒有一個合法的臨床診斷試劑盒供應，因此短期內普遍開展還有難度。分離培養一直是微生物檢測的“金標準”，也是支原體檢測最常用的方法。

縱覽國內有關泌尿生殖道支原體培養的文獻發現，支原體的鑒定主要依據液體培養，它依據Uu利用尿素和Mh以精氨酸為能源，分解產氨和二氧化碳，使pH值升高，含酚紅指示劑的培養液由黃色變紅色提示支原體生長。雖然液體培養基使用方便、快速、判斷容易，事實上泌尿生殖道中某些微生物含有脲酶，能生物利用液體培養基中某些成份，使pH升高而改變顏色，出現嚴重的的假陽性[臨床檢驗雜志2004，22(5)：321-322]。廣譜抗生素的廣泛使用，微生物的耐藥性出現了很大的變遷，泌尿生殖道寄居的微生物呈現多樣化[中國微生態學雜志2003，15(1)：43]。雜菌的存在，一定程度上競爭Uu生長所需的營養，呈優勢生長而干擾支原體最終的結果判斷。另外，產尿素酶雜菌的生長導致酸堿變化，也可造成Uu液體培養結果的錯誤判斷[河北醫學2004，10(7)：614-616]。

固體培養通過顯微鏡觀察有無油煎蛋狀菌落生長、形態特征等性狀鑒別多種支原體，但是國產固體培養基在質量上與進口的A7固體培養基相比有較大差距。進口固體培養基價格昂貴，定購周期長，培養基變得干薄可能影響檢測效果。另外，直接將樣品接種到固體培養基中，其檢測陽性率較低。臨床實踐發現，大量商品化獨立使用的支原體液體、或者固體培養基產品，在敏感性和特異性方面存在較大差異，即使同一品牌的液體培養的陽性率顯著高于固體培養，目前尚無優質的組合使用的支原體培養基及制備方法。

發明內容

本發明是提供檢測泌尿生殖道Uu和Mh的培養基及檢測方法，根據2種支原體生物學特性，優化了維持支原體生長的營養、抑制雜菌生長抗生素的組合。突出了液體培養基可以提高陽性率、固體培養基避免了其他微生物因為改變顏色造成的假陽性，并且顯著提高了固體培養的陽性率。當組合使用，提高了泌尿生殖道Uu和Mh支原體檢測的敏感性和特異性。

本發明提供的泌尿生殖道支原體培養基和檢測方法，其特征是含有胰酶大豆肉湯、酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚紅、HEPES液、小牛血清、硫酸錳、萬古霉素、兩性霉素B、甲氧芐氨嘧啶、多粘菌素、青霉素等要素的配方，并且液體培養基和固體培養基在培養、分離、鑒別泌尿道支原體時組合使用。液體培養基用于接種臨床樣品、抑制雜菌、具有同時促進Uu和Mh支原體生長、指示是否有支原體生長；固體培養基用于觀察培養物是否支原體、鑒別解脲脲原體(Uu)和人型支原體(Mh)。