[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810035462.1
• 申請日: 2008-04-01
• 公開（公告）號: CN101250502A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖磊;廖婧;吳昭
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/11;C12N15/63;A61K35/12;A61P37/00
• 代理公司: 上海金盛協(xié)力知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 沈其梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及制備誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞(Induced?pluripotent?stem?cell， 簡稱iPS細(xì)胞)的方法。

背景技術(shù)

人類胚胎干細(xì)胞具有分化成人體各種類型細(xì)胞的潛能，并為再生醫(yī)療提供了應(yīng)用的可能性 (Thomson?JA.，Itskovitz-Eldor?J.，Shapiro?SS.，et?al.Science.Nov?6?1998；282(5391)：1145-1147)。 然而，免疫排斥反應(yīng)對于人類胚胎干細(xì)胞的移植治療有很大影響。為了能夠培養(yǎng)出病人特異 性的多能干細(xì)胞來消除免疫排斥的影響，人們已經(jīng)嘗試過很多的方法，比如成體細(xì)胞的核移 植(又稱為治療性克隆)，成體細(xì)胞與人體胚胎干細(xì)胞的融合等，但是都沒有獲得成功。通過 轉(zhuǎn)入特定的轉(zhuǎn)錄因子從成體細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生類似人胚胎干細(xì)胞的誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞(iPS?cell)， 建立了取得病人特異性的類似人類胚胎干細(xì)胞的誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞的可能性。

最近，幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室通過將特定的轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)入人的已經(jīng)分化的細(xì)胞，成功的將它們重編程 成為類似的人胚胎干細(xì)胞的多能的干細(xì)胞，他們采用了以下三種表達(dá)特定轉(zhuǎn)錄因子的病毒組 合，a.Oct4，Sox2，C-myc，Klf4(Takahashi?K，Tanabe?K，Ohnuki?M，et?al.Induction?of?pluripotent stem?cells?from?adult?human?fibroblasts?by?defined?factors.Cell.Nov?30?2007；131(5)：861-872)；b. Oct4，Sox2，Nanog，Lin28(Yu?J，Vodyanik?MA，Smuga-Otto?K，et?al.Induced?pluripotent?stem?cell lines?derived?from?human?somatic?cells.Science.Dec?21?2007；318(5858)：1917-1920)；c.Oct4，Sox2， c-Myc，KLF4，hTert，SV40?large?T(Park?IH，Zhao?R，West?JA，et?al.Reprogramming?of?human somatic?cells?to?pluripotency?with?defined?factors.Nature.Jan?10?2008；451(7175)：141-146)。用以 上轉(zhuǎn)錄因子的組合感染人類成纖維細(xì)胞，把人類纖維細(xì)胞重編程成為類似胚胎干細(xì)胞的多潛 能干細(xì)胞，并且證明這些多潛能干細(xì)胞表達(dá)未分化的人類胚胎干細(xì)胞的表面標(biāo)志物，并且能 夠分化成人類胚胎的內(nèi)中外三個(gè)胚層的細(xì)胞。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果使得利用人類成體細(xì)胞產(chǎn)生個(gè)人 特異性的胚胎干細(xì)胞，再次分化為需要類型的細(xì)胞，從而對一些疾病進(jìn)行移植治療提供了強(qiáng) 有力的支持，基本消除了免疫排斥的風(fēng)險(xiǎn)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)道的效率基本相同。效率大約為從 十萬個(gè)起始細(xì)胞獲得十個(gè)誘導(dǎo)的人類多潛能干細(xì)胞，此效率還比較低。低效率會嚴(yán)重影響其 應(yīng)用和推廣。

因此，本領(lǐng)域迫切需要研究出高效的誘導(dǎo)已分化細(xì)胞轉(zhuǎn)化成類似胚胎干細(xì)胞的多潛能干細(xì) 胞的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞的制備方法。

本發(fā)明的另一目的是提供一種通過該制備方法獲得的誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種包括該制備方法獲得的誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞的組合物。所 述組合物可以用于治療相關(guān)的疾病或移植用。

本發(fā)明的第一方面提供一種誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括步驟：

(a)在成體細(xì)胞中導(dǎo)入6種轉(zhuǎn)錄因子：Oct4，Nanog，Sox2，Lin28，c-myc和Klf4；

(b)以胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)上述分化細(xì)胞，使其形成具有胚胎干細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞。

上述轉(zhuǎn)錄因子可以以DNA、蛋白質(zhì)或mRNA的形式被轉(zhuǎn)移進(jìn)細(xì)胞。

在具體實(shí)施例中，上述步驟(a)為將上述6種轉(zhuǎn)錄因子的編碼序列分別克隆到載體上， 然后將這6種載體轉(zhuǎn)化入成體細(xì)胞中。

上述載體為病毒載體或質(zhì)粒。所述載體為慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體或腺病毒載體，即 上述轉(zhuǎn)錄因子先被包裝成病毒。優(yōu)選的，上述載體為慢病毒載體。