[發明專利]一種人工濕地污水處理系統微生物活性檢測方法

有效

• 申請號: 200810035364.8
• 申請日: 2008-03-28
• 公開（公告）號: CN101251473A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: 譚學軍;張辰;唐利;王國華
• 申請（專利權）人: 上海市政工程設計研究總院
• 主分類號: G01N21/17
• 分類號: G01N21/17;G06F19/00;C12Q1/04
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 李浩東

1.一種人工濕地污水處理系統微生物活性檢測方法，其特征在于，依 次包括如下步驟：

(1)從人工濕地污水處理系統中取出附著微生物的植物根須，先將其 超聲振蕩10min，然后收集脫落的生物膜，用無菌水稀釋備用；

(2)將生物活性測試管用無菌水清洗干凈，在105±1℃下烘干至恒重， 記錄質量W1；

(3)向10mL的測試管中依次加入1mL的微生物懸濁液、1.5mL的 pH為8.4的Tris-HCl緩沖溶液和1mL重量濃度為2mg/mL的碘硝基四氮唑 溶液；

(4)將制備完成的樣品放在37±1℃的水浴振蕩器內，暗處振蕩培養 0.5h；

(5)培養過程結束后，向測試管中加1mL體積濃度為37％的甲醛溶 液，終止酶反應，然后將樣品在4000r/min下離心5min，棄去上清液；

(6)向樣品中加入5mL乙醇，混合攪拌均勻，在37±1℃下暗處振蕩 萃取10min；

(7)將萃取完畢的樣品在4000r/min下離心5min，然后在分光光度計 的485nm處，以加入0.1mL間甲酚的樣品為空白對照，測定待測樣品的INTF 萃取液吸光度；

(8)將分離的樣品在105±1℃下烘干至恒重，記錄質量W₂；

(9)采用下式計算：

INT-ETSA=OD452×VK×t×W]]>

計算結果如下：

OD₄₈₅為波長485nm處的上清液吸光度＝1.111；

V為萃取劑體積＝5mL；

K為標準曲線斜率＝47.492mL/mg；

t為培養時間0.5h；

W＝(W₂-W₁)為微生物樣品質量＝0.0056g；

W₂＝11.2386g；

W₁＝11.2330g；

INT-ETSA為微生物電子傳遞體系活性＝41.774mg/(g·h)；

標準曲線的制作：

1)準確稱取0.050gINTF定容于50mL茶色容量瓶中，此溶液即為 1mg/mL的INTF標準溶液；

2)分別吸取1mg?INTF/mL標準溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7， 0.8，0.9，1，2mL加于50mL茶色容量瓶中，再用乙醇分別稀釋至50mL， 搖勻，于是得到每毫升含有0.002，0.004，0.006，0.008，0.010，0.012，0.014， 0.016，0.018，0.020，0.040mgINTF的系列溶液；

3)在721分光光度計的485nm處，用光程1cm的比色皿，以乙醇作 為空白溶液，測定上述11種濃度溶液的吸光度；

4)將上述11種濃度溶液的濃度與相應的吸光度作曲線，繪制出INTF 在乙醇溶液中的標準曲線。

2.一種人工濕地污水處理系統微生物活性檢測方法，其特征在于，依 次包括如下步驟：

(1)從人工濕地污水處理系統中取出附著微生物的濕地基質，先將其 超聲振蕩5min，然后收集脫落的生物膜，用無菌水稀釋備用；

(2)將生物活性測試管用無菌水清洗干凈，在105±1℃下烘干至恒重， 記錄質量W1；

(3)向10mL的測試管中依次加入1mL的微生物懸濁液、2mL的pH 為8.4的Tris-HCl緩沖溶液和2mL重量濃度為2mg/mL的碘硝基四氮唑溶 液；

(4)將制備完成的樣品放在37±1℃的水浴振蕩器內，暗處振蕩培養 0.5h；

(5)培養過程結束后，向測試管中加1mL體積濃度為37％的甲醛溶 液，終止酶反應，然后將樣品在4000r/min下離心5min，棄去上清液；

(6)向樣品中加入5mL乙醇，混合攪拌均勻，在37±1℃下暗處振蕩 萃取10min；

(7)將萃取完畢的樣品在4000r/min下離心5min，然后在分光光度計 的485nm處，以加入0.2mL間甲酚的樣品為空白對照，測定待測樣品的INTF 萃取液吸光度；

(8)將分離的樣品在105±1℃下烘干至恒重，記錄質量W2；

(9)采用下式計算：

INT-ETSA=OD485×VK×t×W]]>

計算結果如下：

OD₄₈₅為波長485nm處的上清液吸光度＝0.828；

V為萃取劑體積＝5mL；

K為標準曲線斜率＝47.492mL/mg；

t為培養時間0.5h；

W＝(W₂-W₁)為微生物樣品質量＝0.0063g；

W₂＝10.5885g；

W₁＝10.5822g；

INT-ETSA為微生物電子傳遞體系活性＝27.674mg/(g·h)；

標準曲線的制作：

1)準確稱取0.050gINTF定容于50mL茶色容量瓶中，此溶液即為 1mg/mL的INTF標準溶液；

2)分別吸取1mg?INTF/mL標準溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7， 0.8，0.9，1，2mL加于50mL茶色容量瓶中，再用乙醇分別稀釋至50mL， 搖勻，于是得到每毫升含有0.002，0.004，0.006，0.008，0.010，0.012，0.014， 0.016，0.018，0.020，0.040mgINTF的系列溶液；

3)在721分光光度計的485nm處，用光程1cm的比色皿，以乙醇作 為空白溶液，測定上述11種濃度溶液的吸光度；

4)將上述11種濃度溶液的濃度與相應的吸光度作曲線，繪制出INTF 在乙醇溶液中的標準曲線。