[發明專利]糯玉米自交系申W22特異分子標記及在其后代品種鑒定中的應用

無效

• 申請號: 200810035302.7
• 申請日: 2008-03-28
• 公開（公告）號: CN101545004A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發明（設計）人: 段可;黃劍華;王義發;丁向真;沈雪芳
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 韋 東

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及糯玉米自交系申W22(國家品種權號：CNA20010096.3)高度特異遺傳穩定的14對SSR標記引物及其在鑒定未知樣品是否為糯玉米申W22的后代品種并判定其種子純度中的應用。?

背景技術

種質資源的鑒定和純度檢驗對于農業生產和科研育種都非常重要，根據農藝性狀區分種質資源在多數情況下都很困難。DNA分子標記提供了物種根本的遺傳特征，是不同物種遺傳變異的直接反映，因此成為種質資源鑒定最有效途徑。目前，有5種常見分子標記技術應用于品種鑒定，包括RAPD、RFLP、AFLP、SSR、SCAR標記。?

RFLP(限制性酶切長度多態性)標記方法的缺點是實驗操作較繁瑣，檢測周期長。RAPD(隨機擴增多態DNA)技術產生的多態性中等，重復性較差。AFLP(擴增片段長度多態性)雖然多態性高，但是穩定性不夠好。SCAR(序列特異擴增區域)標記是在RAPD技術的基礎上發展起來的，雖然重復性好但只能鑒定少數位點，因此在基因定位和作圖中的應用更好。?

SSR(simple?sequence?repeat)稱為簡單序列重復，又稱微衛星DNA，是一種由2-6個核苷酸為重復單位組成的長達幾十個核苷酸的串聯重復序列，它廣泛分布于真核生物基因組中，不僅存在于基因組重復序列區域，也存在于編碼基因的調節區。由于重復單元數目不完全相同，因而形成多態性；且其旁鄰多是保守的序列，可以通過設計特異性引物進行PCR擴增。SSR標記具有數量豐富、多態性高、遺傳上呈共顯性、擴增片段穩定精確的特點，結合SSR多態性及其片段大小，便可建立每一品種的標準圖譜，以鑒別品種。相比來，SSR既有RAPD簡單、快捷、經濟的優點，又有AFLP多態性高的優點，同時克服了RAPD和AFLP重復性差的缺點。?

玉米基因組包含24-27億堿基，與人類基因組大小相近、約為水稻基因組的6-7倍。玉米全基因組約80％由重復序列構成，占7.5％全基因組的編碼基因狀如小島散布在長端重復(LTR，long?terminal?repeat)-反轉座子類重復序列的大海中。玉米基因組的特點使得利用SSR技術成為進行玉米基因型鑒定的有效手段。?

上海農科院育成的糯玉米自交系申W22，具有優質、糯性品質好、早熟性狀遺傳穩定、配合力高等特點，于2003年獲得國家品種權，品種權代號為CNA20010096.3。以申W22為父本育成的滬玉糯一號，是我國繼蘇玉糯1號后第二個國家級審定的鮮食糯玉米雜交種。隨后，又以申W22為父本育成兩個更優質的糯玉米品種：早熟白色糯玉米滬玉糯二號、大穗高產優質白色糯玉米滬玉糯三號品種。這兩個品種均通過上海市品種委員會審定，?適宜江南地區春秋季作為鮮食糯玉米栽培，或在適宜地區作為高產蠟質淀粉玉米生產，是當前的主推品種。2007年統計，以申W22為父本組配的糯玉米新品種滬玉糯一號、二號、三號，推廣種植已遍布我國大陸20多個省(市、自治區)，累計推廣達50萬畝，農民新增收入達3億元以上，產生了顯著的社會、經濟和生態效益。因此，基于申W22的特異DNA指紋對申W22及其后代品種的分子鑒定和純度檢驗，對于生產栽培者和育種科學家的實際工作和利益保護具有重要應用價值。?

本發明在對覆蓋玉米全基因組250對SSR引物篩選的基礎上獲得SW22可產生特異穩定多態性、帶型組合易于識別、在其后代顯性好的14對SSR引物，應用這14對引物可以成功鑒定申W22及其雜交后代糯玉米品種。?

發明內容

因此，本發明一方面提供一種糯玉米品種鑒定或種子純度檢驗的試劑盒，所述試劑盒含有4-14對如下所述的引物對：SEQ?ID?NO：1和2、SEQ?ID?NO：3和4、SEQ?IDNO：5和6、SEQ?ID?NO：7和8、SEQ?ID?NO：9和10、SEQ?ID?NO：11和12、SEQ?IDNO：13和14、SEQ?ID?NO：15和16、SEQ?ID?NO：17和18、SEQ?ID?NO：19和20、SEQ?ID?NO：21和22、SEQ?ID?NO：23和24、SEQ?ID?NO：25和26、和SEQ?ID?NO：27和28。?