[發明專利]一種生物條形碼探針的制備方法

無效

• 申請號: 200810034675.2
• 申請日: 2008-03-14
• 公開（公告）號: CN101241126A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 朱旺升;賀明星;范忠鵬;周宇荀;肖君華
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N33/50;C12Q1/68
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種生物條形碼探針的制備方法，包括以下步驟：

(1)將納米金溶液與等體積的吐溫20緩沖液混合，離心，濃縮；

(2)將上述濃縮液加入到巰基化探針中，水浴過夜；

(3)加入高濃度的NaCl溶液，水?。?/p>

(4)離心，洗滌2-3次沉淀后，稀釋，得生物條形碼探針；

(5)將終濃度10umol/L生物條形碼探針、終濃度0.1mg/ml磁珠探針和靶序列終濃度1nmol/L?DNA混合、置于55℃水浴雜交20分鐘；

(6)磁分離器分離磁珠，去除未雜交的生物條形碼探針，并洗滌2-3次；

(7)加入洗脫液?；旌虾笾糜?5℃水浴20分鐘。處理完成后，用磁分離器去除磁珠，留上清液進行熒光檢測。

2.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述納米金顆粒大小為30nm，濃度為3.2fmol/L。

3.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中吐溫20緩沖液是由吐溫20和雙蒸水混合配置而成，吐溫20的終濃度為1.5μl/mL，pH值為8.0。

4.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述巰基化探針的巰基化DNA長度為25個堿基，巰基化DNA的5’端為巰基修飾，3’端為FAM熒光修飾，同時DNA的3’端的部分序列和待檢的靶序列DNA互補。

5.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述濃縮液中納米金的濃度為3.2mol/L，混合的巰基化探針的終濃度為100umol/L。

6.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述高濃度的NaCl溶液的鈉離子的終濃度為1mol/L。

7.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)、(4)中的水浴是37℃～55℃的水浴。

8.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)、(4)中的離心速度均為12000rpm/min，離心時間分別為5分鐘和2分鐘。所述步驟(4)、(6)洗滌用的洗滌液成分為0.01M磷酸氫鈉緩沖液，0.15M?NaCl，0.1％SDS，pH?7.4。

9.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述磁珠探針由親和素磁珠與生物素修飾的寡核苷酸序列連接而成。

10.根據權利要求1所述的生物條形碼探針的制備方法，其特征在于：所述步驟(7)的洗脫液為濃度為10mol/L的二硫蘇糖醇溶液。