[發明專利]乙型肝炎病毒核心啟動子區突變及其用途

無效

• 申請號: 200810034581.5
• 申請日: 2008-03-13
• 公開（公告）號: CN101532048A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 屠紅;郭霞;金晏;錢耕蓀;曹志剛
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/70
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐 迅

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明涉及乙型肝炎病毒核心啟動子區突變，可根據所述突變情況來制備判斷病人易感性和/或預后的檢測試劑或試劑盒。

背景技術

2000年調查數據顯示，原發性肝細胞肝癌(以下簡稱肝癌)是全球第五種常見惡性腫瘤，其死亡率居全球第三位。中國1990-1992年的抽樣數據同樣顯示，全國肝癌標化死亡率為17.83/10萬，約占癌癥死亡的18.82％，居第2位。流行病學資料表明乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒慢性感染以及黃曲霉毒素暴露是肝癌發生的重要外界環境危險因素，最新調查數據顯示，約53％的肝癌發生與HBV感染有關，HBV對人類生命健康造成了極大的危害。

江蘇啟東是中國肝癌高發區，也是重要的腫瘤高發現場。HBV感染和黃曲霉毒素暴露是啟東肝癌發生的主要原因。啟東自然人群中HBsAg與肝癌關系的前瞻隊列顯示，男性HBsAg(+)者與(-)者的肝癌發生率分別為619.30/10萬與51.70/10萬，RR為11.98；而女性HBsAg(+)者與(-)者的肝癌發生率分別為193.96/10萬與11.37/10萬，RR為17.06，差異均有顯著性。可見，HBV與肝癌的因果關系強烈。啟東長期的腫瘤登記資料顯示，肝癌一直是啟東居民第1位的惡性腫瘤，根據1978-2002年的調查數據顯示，啟東男女性肝癌年齡調整發病率分別為79.6/10萬與23.1/10萬；相比之下，全國2000年估計的肝癌年齡調整發病率分別為38.9/10萬與14.5/10萬。

乙型肝炎病毒DNA為部分環狀雙鏈DNA，約有3200堿基對，由正鏈和負鏈構成。負鏈有4個開放讀碼區(ORF)，分別為前S/S區，前C/C區，P區和X區。除此之外還有多個基因表達調控序列，包括2個直接重復序列(DRI、DRII)、2個增強子(ENI、ENII)和4個啟動子(SP1、SP2、XP和CP)。S區包括S、pre-S1和pre-S2，可以合成小蛋白、中蛋白及大蛋白。前C/C區用于合成HBcAg和HBeAg，X區和P區分別合成HBx和DNA聚合酶。CP(nt.1643-1849)包括BCP區(basal?core?promoter，BCP)和上游調節區(URR)。BCP(nt.1742-1849)指導3.5kb前C?mRNA(pre-C?mRNA)和2.4kb前基因組mRNA(pregenome?mRNA)的轉錄，是HBV復制的重要調控區。URR(nt.1643-1741)位于BCP的5′端，總體來講它可以在肝細胞內刺激pre-C?mRNA和pgRNA的轉錄。

HBV復制過程中要經過逆轉錄，由于逆轉錄酶缺乏有效的堿基校對功能，故HBV基因組比一般DNA病毒易發生變異。HBV的不同基因區均可發生突變，病毒DNA序列突變可能導致病毒在宿主體內持續存在，導致慢性感染，甚至致癌。隨著對HBV與肝癌關系研究的深入，到目前為止，人們發現了許多與肝癌發生密切相關的突變位點。BCP區nt.1762A→T和nt.1764G→A的雙突變最常見，是HBV典型的突變類型之一。BCP發生變異，影響HBV復制，同時也下調HBeAg的合成，與疾病的不良預后密切相關。轉染實驗研究表明，nt.1762T/1764A雙突變可以減少pre-C?mRNA的量和HBeAg的分泌。BCP突變還可以上調病毒的復制，可能通過增加mRNA轉錄來上調基因組的表達。最近HBV雙突變與肝癌發生的關系也受到廣泛的重視。有研究結果提示，nt.1762^T/176⁴A雙突變與肝臟病變的嚴重程度相平行，從3％的無癥狀攜帶者到64％的肝細胞癌(HCC)患者(OR＝20.04，95％CI7.25-55.4，P<0.001)，雙突變與肝癌相關有非常顯著性(OR＝10.60，95％CI4.92-22.86，P<0.001)。