[發(fā)明專利]黃瓜側枝抑制基因cls的蛋白編碼序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810034529.X
• 申請日: 2008-03-13
• 公開（公告）號: CN101240281A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發(fā)明（設計）人: 原麗華;蔡潤;朱立煌;姚丹青;張弛
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/79;C12N1/19;C12N5/10;C07K14/415;C12Q1/68;A01H1/00;A01H5/00
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術領域

本發(fā)明涉及的是一種基因工程技術領域的編碼序列，特別是一種黃瓜側枝抑制基因cls的蛋白編碼序列。

背景技術

植物分枝發(fā)育在植物形態(tài)建成中有重要的地位。作物分枝是影響作物產量的重要農藝性狀之一，在玉米的馴化過程中通過減少分枝可以達到增產的目的，在水稻中分蘗數(shù)目過多或者過少都不利于產量的提高。對于黃瓜來說，產量高低和側枝數(shù)目也有密切的關系。到目前為止，黃瓜側枝一直被作為數(shù)量性狀進行研究，已經定位了幾個和側枝發(fā)育相關的QTLs。但從來沒有分離得到基因，更沒有進行過詳細研究。但在玉米、水稻、擬南芥、番茄、豌豆中已經分離得到了多個和側枝發(fā)育相關的基因，其中最引人注目的是番茄側枝抑制基因ls的分離和功能驗證。番茄的ls基因是最早影響腋生分生組織形成的基因之一，是植物特有的GRAS轉錄因子家族的重要成員。GRAS基因家族的蛋白產物均為轉錄因子，具有調控其它基因轉錄的能力，名字由最早發(fā)現(xiàn)的三個成員，GAI，RGA，SCR的首字母拼寫而成。典型的GRAS蛋白有400-700個氨基酸組成，兩個亮氨酸七聚體重復序列(Leucine?Heptad?Repeats)包圍的VHIID結構域，一個保守的C-末段和長度、序列可變的N-末端，也就是N-末端的序列賦予了其物種特異性。本發(fā)明克隆的基因cls也屬于GRAS基因家族，預測應該也是一個轉錄因子。

在對現(xiàn)有技術文獻的分析中，雖然《Proc.Natl.Acad.Sci.USA美國國家科學院學報》，1999，1，96：290-295發(fā)表了文章“The?lateral?suppressor(Ls)geneof?tomato?encodes?a?new?member?of?the?VHIID?protein?family番茄側枝抑制基因Ls編碼蛋白是VHIID家族的一個新成員”對番茄側枝抑制基因Ls的功能作了詳細闡述；《Theor?Appl?Genet理論運用遺傳學》在2003，107：875-883發(fā)表的文章“Comparative?analysis?of?response?to?phenotypic?andmarker-assisted?selection?for?multiple?lateral?branching?incucumber(Cucumis?sativus?L.)黃瓜多側枝性狀的分子標記輔助選擇與表型的比較分析”對多側枝性狀進行了QTLs定位，但并未分離得到基因。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種黃瓜側枝抑制基因CLS的編碼序列。本發(fā)明可以促進側芽原基形成，用于糧食作物、花卉植物、經濟作物、油料作物上，增加它們的側枝數(shù)目，從而增加產量。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離出的cDNA分子，該分子包括：編碼具有黃瓜側枝抑制蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?IDNO.3中從核苷酸第491-1666位的核苷酸序列有至少70％的同源性。或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件(雜交溫度在55℃-60℃之間)與SEQ?ID?NO.3中第491-1666位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列的多肽，或其保守性變異多肽、或其活性片斷，或其活性衍生物。更佳地，所述的編碼序列具有SEQ?ID?NO.3中第491-1666位的核苷酸序列。

在本發(fā)明另一個方面，提供了一種分離出的黃瓜側枝抑制基因的蛋白質多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.3氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段。該多肽在植物腋生分生組織形成的早期表達，是植物側生器官形成必不可少的蛋白。

本發(fā)明還提供了一種載體，它包含上述的DNA分子。一種核酸分子，它包含所述的DNA分子中8-100個連續(xù)核苷酸。

本發(fā)明還提供了一種用上述載體轉化的宿主細胞，它是真核細胞。在實例中該宿主細胞是擬南芥。

本發(fā)明中，“分離的”、“純化的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態(tài)下位于其兩側的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經與天然狀態(tài)下伴隨核酸的組分分開，而且已經與在細胞中伴隨其的蛋白質分開。