[發(fā)明專利]強(qiáng)直性脊柱炎易感性檢測方法和試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810034225.3
• 申請(qǐng)日: 2008-03-05
• 公開（公告）號(hào): CN101525657A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃薇;雷蓉;牛振民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海人類基因組研究中心
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 徐 迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體地涉及抗原肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(Transporter?of?Antigen?Peptides?1，TAP1)的單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide?polymorphism，SNP)及其與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性。本發(fā)明還涉及檢測這些SNP的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

強(qiáng)直性脊柱炎又名別赫捷列夫氏(VonBechterev)病或馬-施二氏(Maritstrumpell)病，是一種慢性、進(jìn)行性，中軸關(guān)節(jié)受累的慢性炎癥性疾病。主要影響骨盆的骶髂關(guān)節(jié)、脊柱關(guān)節(jié)和椎旁組織。主要癥狀為下腰痛、脊椎僵硬及運(yùn)動(dòng)范圍受限、X線顯示兩側(cè)骶髂關(guān)節(jié)炎(sacroilitis)為其特征。由于該病一般先侵犯骶髂關(guān)節(jié)，并重點(diǎn)累及脊柱，最終導(dǎo)致脊柱骨性強(qiáng)直，故目前國內(nèi)外多稱之為強(qiáng)直性脊柱炎(Ankglosing?Spondytitis，AS)。

強(qiáng)直性脊柱炎有明顯的種族性，在不同民族中發(fā)病率的差異很大。印第安人發(fā)病率最高，北美印第安人發(fā)病率為2.7％～6.3％。其次為白種人，白種人中發(fā)病率為0.1％～1.4％。黃種人低于白種人，我國約為0.3％。而黑人發(fā)病率最低，約為白人的1/4，在非洲僅為0.2％。

強(qiáng)直性脊柱炎好發(fā)于20至40歲的成年人，尤其是20～30歲的青年男性。

?強(qiáng)直性脊柱炎呈常染色體顯性遺傳，有明顯的家族遺傳傾向，遺傳因素＞90％。據(jù)調(diào)查，強(qiáng)直性脊柱炎病人親屬發(fā)病率比一般人高一倍左右，同胞復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)比為82。90％以上的AS病人具有HLA-B27陽性，在正常人群中陽性率為8％；子女HLA-B27陽性占50％，發(fā)生強(qiáng)直性脊柱炎的占25％。目前基本上已有定論，HLA-B27作為獨(dú)立的致病基因在AS的發(fā)病中起作用。因?yàn)樵贖LA-B27陽性個(gè)體中只有1％～5％發(fā)展成為AS，提示還有其他基因參與AS的發(fā)病。

近年來，單核苷酸多態(tài)性(SNP)和單倍型(haplotype)概念在多基因疾病研究中的廣泛運(yùn)用，為在分子水平上研究強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制開辟了全新的思路。同時(shí)，高通量、低成本的SNP檢測手段的不斷出現(xiàn)也為SNP大規(guī)模快速分型提供了可能。

SNP的存在與否以及等位基因頻率存在人種及地域的差異，這就提示多基因疾病遺傳異質(zhì)性的存在，即同一疾病或性狀在不同的人群中可能是不同的遺傳因素造成的。

另外，不同人群中SNP及其單倍型的類型和頻率存在的這種差異可能與不同人群對(duì)藥物及環(huán)境因素的反應(yīng)性不同密切相關(guān)。

強(qiáng)直性脊柱炎作為一種遺傳因素起較大作用的疾病，尋找其相關(guān)基因進(jìn)而闡明強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病的遺傳機(jī)制已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)。

雖然已有許多關(guān)于各種基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的研究，但沒有證實(shí)TAP1基因與強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)性的報(bào)道，更沒有證實(shí)本發(fā)明所述的TAP1基因SNP與強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)性的報(bào)道。

綜上所述，為了盡早診斷強(qiáng)直性脊柱炎，本領(lǐng)域迫切需要尋找強(qiáng)直性脊柱炎易感基因，并開發(fā)檢測強(qiáng)直性脊柱炎的方法和試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種輔助診斷(尤其是早期診斷)強(qiáng)直性脊柱炎的方法及檢測試劑盒。

本發(fā)明的另一目的是提供一種新的治療強(qiáng)直性脊柱炎的方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種對(duì)個(gè)體的強(qiáng)直性脊柱炎易感性進(jìn)行診斷的方法，它包括步驟：

檢測該個(gè)體的TAP1基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白，并與正常的TAP1基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白相比較，

存在差異就表明該個(gè)體患強(qiáng)直性脊柱炎的可能性高于正常人群。

在另一優(yōu)選例中，所述的方法中檢測的是TAP1的基因或轉(zhuǎn)錄本，并與正常TAP1核苷酸序列比較差異。

在另一優(yōu)選例中，所述的差異是以下的單核苷酸多態(tài)性：

430位G→T；

其中，核苷酸位置編號(hào)基于SEQ?ID?NO：1。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種檢測樣品是否存在抗原肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TAP1)的單核苷酸多態(tài)性的方法，包括步驟：

(a)用TAP1基因特異性引物擴(kuò)增樣品的TAP1基因，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和

(b)檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在以下單核苷酸多態(tài)性：

430位G→T；

其中，核苷酸位置編號(hào)基于SEQ?ID?NO：1。

在另一優(yōu)選例中，所述的基因特異性引物具有SEQ?ID?NO：2和3的序列。