[發明專利]含有重組人血清白蛋白融合干擾素的穩定水溶液

有效

• 申請號: 200810033915.7
• 申請日: 2008-02-26
• 公開（公告）號: CN101234193A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 王英明;胡貞;孟麟;丁劍鋒
• 申請（專利權）人: 上海欣百諾生物科技有限公司
• 主分類號: A61K38/38
• 分類號: A61K38/38;A61K38/21;A61K47/18;A61K47/22;C07K19/00;A61P31/20;A61P1/12
• 代理公司: 上海光華專利事務所
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及融合蛋白的醫用穩定制劑，尤其涉及一種含重組人血清白蛋白融合干擾素的穩定制劑。

背景技術

干擾素是具有廣泛生物學活性的調節蛋白質，有抗病毒、免疫調節的作用，對多種腫瘤細胞具有輔助性殺滅或抑制增殖作用，還能抑制癌基因表達從而阻止或減慢正常細胞向腫瘤細胞轉化的過程。自80年代開始研制出重組人干擾素以來，目前有60多個國家批準上市。廣泛用于乙肝、丙肝；白血病；皰疹、濕疣；腎癌、膀胱癌；淋巴瘤、骨髓瘤、黑色素瘤等多種病毒性疾病和腫瘤的治療。但普通干擾素也存在某些不夠理想之處，由于干擾素分子量小，易被腎小球濾過，所以皮下注射后吸收很快，半衰期短，容易被酶水解等，一般要每天注射，至少每周注射三次，應用不夠方便。而干擾素治療肝炎、腫瘤、類風濕及多發性硬化癥等疾病時，治療周期常常長達數月甚至數年，這種長期大劑量頻繁用藥增加了病人的痛苦和治療費用而且易產生發燒、疲乏、食欲減退及流感樣癥狀等毒副作用。

人血清白蛋白融合干擾素是人血清白蛋白與干擾素蛋白的融合蛋白，能顯著延長干擾素體內半衰期，增強抗病毒作用，提高治療效果，并且減少注射給藥頻率。人血清白蛋白融合干擾素的相關專利已在國內外公開，如美國專利US6946134、US6905688、US6926898，中國專利01124110.1、200410042814.8、200610049070.1、200610023785.X。雖然，人血清白蛋白融合干擾素比普通干擾素的穩定性有所提高，但作為蛋白類藥物，其穩定性還是無法與常規化學藥物相比。根據以往的重組干擾素臨床使用經驗，在治療病毒性肝炎性等疾病需要3-6個月的連續給藥周期。因為給藥時間較長，活性藥物需要有較好的穩定性。眾所周知，一般重組蛋白質的穩定性比較差，在保存過程中會受到多種環境因素的影響，例如溫度，濕度，氧和紫外線等都可能使蛋白發生多種物理或化學變化，造成蛋白質的聚合、分解、氧化或變性等。這些變化使蛋白質活性喪失從而降低治療效果，并且嚴重的可能引起毒副作用。因此，研究出一種能穩定保存人血清白蛋白融合干擾素，并適合于實際臨床使用的制劑處方是很有意義的。本發明就涉及此方面內容。

發明內容

本發明的目的是提供一種含有重組人血清白蛋白融合干擾素的穩定水溶液，該水溶液可穩定保存重組人血清白蛋白融合干擾素，能夠充分防止重組融合蛋白的聚集、降解、構象改變等理化性質的變化，從而保持其有效組分的生物學活性。

本發明的技術方案基于下述理論及研究：

重組人血清白蛋白融合干擾素含有39個半胱氨酸，其中38個形成19對二硫鍵，還有1個半胱氨酸呈還原狀態，能與分子外的半胱氨酸形成二硫鍵從而形成共價鍵的聚體。研究發現，在重組人血清白蛋白融合干擾素的保存過程中，隨著時間的增加融合蛋白的聚體現象也逐漸增加，生物學活性逐漸降低。所以推測聚體化現象可能是導致重組人血清白蛋白融合干擾素在保存過程中生物學活性逐漸降低的主要原因。為了防止重組人血清白蛋白融合干擾素的聚體形成，認為需要在溶液中保持一個適合的還原環境，即在溶液中添加適合的還原劑。研究發現，在含適合的pH的緩沖鹽的溶液中單獨添加還原性物質就能明顯的提高重組人血清白蛋白融合干擾素的穩定性，其對制劑穩定性的影響要超過其它的常用輔料，如表面活性劑、金屬離子絡合物、糖類、多元醇類、氨基酸、中性無機鹽等。

基于上述理論及研究，本發明采用了下述技術方案：

一種含有重組人血清白蛋白融合干擾素的穩定水溶液的，它除了含有安全有效量的重組人血清白蛋白融合干擾素外，還含有磷酸鹽和可藥用的還原性物質。

上述磷酸鹽在溶液或重建后的溶液中起到緩沖溶液pH值的作用。一般為無機磷酸鹽。

蛋白質是兩性物質，在環境的pH大于其等電點的情況下帶負電荷，反之帶正電荷，在極端的酸性或堿性情況下都會引起蛋白質構象的變化而導致生物學活性的喪失。重組人血清白蛋白融合干擾素的等電點在5.3左右，考慮到在等電點附近蛋白質的溶解性會下降而出現沉淀。前期的實驗證明當溶液的pH小于4.5時重組融合蛋白會出現降解的現象，而pH在堿性狀態下有利于半胱氨酸氧化形成二硫鍵。根據上述現象，優先pH范圍為6.5-7.5。