[發明專利]一種應用于結核病快速診斷的特異性融合蛋白

有效

• 申請號: 200810033318.4
• 申請日: 2008-01-31
• 公開（公告）號: CN101235090A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 張舒林;王洪海;孫戰強
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;G01N33/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛;盛志范

1、一種應用于結核病快速診斷的特異性融合蛋白，其特征在于由38KD、Mtb81和MPT32三種蛋白抗原的關鍵表位依次連接構成，記為38KD-Mtb81-MPT32；38KD蛋白抗原表位由序列表中SEQ?ID?NO：1所示的DNA序列所決定；Mtb81蛋白抗原表位由SEQ?ID?NO：2所示的DNA序列所決定；MTB32蛋白抗原表位由SEQ?ID?NO：3所示的DNA序列所決定。

2、一種如權利要求1所述的特異性融合蛋白的構建方法，其特征在于具體步驟如下：

(1)、多表位融合蛋白的設計：通過多種生物軟件將38KD、Mtb81和MPT32的基因序列和蛋白質結構進行分析，確定融合蛋白抗原表位的區域、組合和順序；順次將38KD蛋白抗原、Mtb81蛋白抗原和MTP32蛋白抗原連接而形成融合蛋白；38KD抗原的表位置于融合蛋白的氨基端，MPT32蛋白抗原的表位置于融合蛋白的羧基端；

(2)、多表位融合蛋白的分子克?。阂罁蚬こ碳夹g，采用重疊引物法，設計連接肽GGGGS序列，以此序列首先將38KD抗原表位編碼基因與Mtb81抗原表位基因擴增并連接成38KD-Mtb81融合蛋白基因，其中38KD抗原上游擴增引物添加Xba?I酶切位點，Mtb81抗原下游擴增引物添加BamH?I酶切位點；雙酶切，構建pET32a的融合基因表達載體；然后擴增、克隆MPT32抗原表位基因，在上游擴增引物添加BamH?I酶切位點，下游擴增引物添加EcoR?I酶切位點；將含有38KD-Mtb81融合基因的重組質粒用限制性內切酶BamH?I和EcoR?I進行酶切，然后與經同樣酶切的MPT32抗原表位基因進行連接，最終形成38KD-Mtb81-MPT32融合蛋白基因，并使38KD抗原與Mtb81抗原之間以及Mtb81抗原與MPT32抗原之間通過連接肽相聯接。