[發明專利]苯丙氨酸衍生物在制備抗乙肝病毒藥物中的用途

無效

• 申請號: 200810033156.4
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101491514A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 王勇翔;胡有洪;聞玉梅
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K31/198
• 分類號: A61K31/198;A61P1/16;A61P31/20
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬化學合成藥物領域，涉及化合物苯丙氨酸衍生物(WEN)在抗乙肝病毒復制中的藥用用途，具體涉及所述的化合物在細胞內抗乙肝病毒復制的用途。

背景材料

乙型肝炎病毒(HBV)是引起人類慢性乙型肝炎，肝硬化甚至肝癌的重要病因。乙肝病毒的復制與上述疾病的發生與發展有重要相關性。病毒基因組所編碼的病毒DNA聚合酶是決定病毒復制性高低的關鍵組分。研究表明，乙肝病毒DNA聚合酶由末端蛋白，連接臂，逆轉錄酶(RT)和RNaseH酶四部分組成。其中逆轉錄酶的作用是以病毒前基因組RNA為模板，逆轉錄成病毒DNA，然后經過DNA復制子代DNA[Radziwill，G.et?al.1990.J?Virol.64：613-20.]。

有研究公開了根據HBV的RT結構與功能，設計了數種抗乙肝病毒的藥物，如拉米呋啶(3TC)，恩替卡韋等。目前，已知的抗病毒RT藥物，其中，一大類為核苷(酸)類似物，其抗病毒原理是通過摻入病毒DNA阻止核苷酸鏈繼續延長而阻斷病毒復制；另一類為非核苷類藥物，其大部分為不同的疏水性化合物，其抗病毒原理是通過作用于RT中的疏水性“口袋”(pockets)而阻礙RT的正常功能[Karayiannis.2003.J?Antimicrob?Chemother.51：761-785.；Spence?R.A.et?al.1995.Science.267：988-993.]。目前，臨床上使用的HBV?RT抑制劑均為核苷(酸)類似物。但是，長期使用核苷(酸)類似物，可致使HBV對該類藥物產生耐藥性，為此，臨床治療需要研發新的抗病毒藥物。

苯丙氨酸衍生物(WEN)曾被報道對丙型肝炎病毒聚合酶具有抑制作用[WangM.et?al.2003，J.Biol.Chem.278：9489-9495.]。該化合物在2005年獲得美國專利[USPatent：US?6,887,877?B2.]；專利名稱為：治療或預防黃病毒感染的化合物和方法(Compounds?and?methods?for?the?treatment?or?prevention?of?Flavivirus?infections)。該專利公開了WEN及其衍生物的結構，以及在治療黃病毒科病毒感染中的應用。目前尚未見WEN及其衍生物用于抑制HBV尤其是HBV?RT及其復制的報道。

復旦大學分子病毒學實驗室長期以來進行HBV?RT的研究，在HBV?RT拇指亞區發現有一段氨基酸保守的序列，并證明該區突變后有影響HBV復制的作用[Lin，X.et?al.2001.J?Virol.75：11827-33.；Wang?YX.et?al，2007.J?Med?Virol.79：676-682.；Wang?YX.et?al，2007.FEBS?Lett.581：558-564.]，[中國專利申請號-200510112431.8]。

發明內容

本發明的目的是提供苯丙氨酸衍生物的新的藥用用途，具體涉及苯丙氨酸衍生物在制備抗乙肝病毒藥物中的用途。

本發明所述的苯丙氨酸衍生物((2s)-2-[(2，4-二氯-苯甲酰基)-(3-三氟甲基苯基)-氨基]-3-苯基-丙酸)，((2s)-2-[(2，4-dichloro-benzoyl)-(3-trifluoromethylbenzyl)-amino]-3-phenyl-propionic?acid，WEN)為現有技術公開的化學合成法合成的化合物。

HBV尚無簡單可行的體外細胞培養技術，本發明首先建立可代表HBV復制的細胞內病毒復制的技術平臺，以此為基礎應用WEN與HBV作用檢驗WEN是否有抗HBV的作用。

本發明利用乙肝病毒基因組轉染細胞研究病毒復制技術，測定苯丙氨酸衍生物(WEN)抗乙肝病毒復制的作用。

本發明進行了大量篩選抑制HBV?RT化合物的研究，分別用不同濃度的所述的WEN進行抑制HBV復制的實驗，實驗結果證明，所述的苯丙氨酸衍生物WEN具有抗乙肝病毒復制的新用途，尤其是WEN在細胞內抗乙肝病毒復制。

本發明所述的乙肝病毒可以是不同乙肝病毒基因型及耐藥毒株。

鑒于WEN可能作用于HBV?RT拇指亞區，本發明在此基礎進行了WEN在抗HBV復制中的應用實驗：

采用已知的全基因組HBV轉染Huh-7細胞及復制效率測定方法，進行WEN對細胞內HBV復制抑制的測定，