[發明專利]非洲爪蟾XPAPC基因啟動子及其組織特異性增強子

無效

• 申請號: 200810033086.2
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101492673A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 丁小燕;王金虎;婁鑫
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 范 征

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，更具體地，本發明涉及非洲爪蟾非洲爪蟾軸 旁原鈣粘連蛋白基因(Xenopus?Paraxial?Protocadherin(XPAPC))啟動子及其 用途。

背景技術

細胞生物的早期發育中，原腸運動是最基本的形態發生事件之一。通過原 腸運動中精細調控的大規模細胞遷移和重排，胚胎的體軸得以建立，即將形成 的三個胚層的邊界也得以確定。非洲爪蟾Xenopus?laevis作為兩棲動物的代 表被廣泛地使用來研究原腸運動中細胞的運動和分子機制。通過使用各種顯微 成像技術，非洲爪蟾胚胎原腸運動中的細胞遷移已經被詳細地觀察和描述。然 而，關于這些運動的動力來源和調控這些運動的分子機制還所知不多。

在非洲爪蟾胚胎中，包括原鈣粘連蛋白(Protocadherin)、整聯蛋白 (integrins)和纖連蛋白(fibronectin)在內的結構分子都參與原腸運動中的 細胞遷移。非洲爪蟾的Xenopus?Paraxial?Protocadherin(XPAPC)基因是一個 原鈣粘連蛋白基因，它在進行原腸運動的胚胎中首先表達在Spemann組織者 (Spemann?organizer)，隨后表達在軸旁中胚層。先前的研究表明XPAPC在原 腸運動中能促進匯聚伸展運動(convergent?extension，CE)，此外，XPAPC也 參與中胚層和內胚層之間的組織分離(tissue?separation)、體節形成 (somitogenesis)以及器官發生(organogenesis)。與其它的粘附分子類似， XPAPC作為細胞結構分子的同時也作為信號通路的成員參與生物學事件。最近 的研究工作揭示XPAPC通過與非經典Wnt信號通路相互作用以及下調細胞內 C-cadherin分子的粘附能力來調控細胞的粘附能力和遷移。此外，Chung等人 最近發現XPAPC與FGF信號通路的下游基因ANR5在原腸運動中存在具有生物 學意義的相互作用。然而除了Wnt5a和Lim1被研究證實能激活XPAPC的表達 之外，關于XPAPC的表達調控機制仍然是一個有待研究的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供非洲爪蟾近軸原鈣粘連蛋白基因(XPAPC)的啟動子 及其用途。

本發明的另一目的在于提供含有所述啟動子的表達載體和宿主細胞。

在本發明的第一方面，提供一種分離的核酸(啟動子)序列，所述核酸序列 選自下組：

(1)具有SEQID?NO：1中所示的核酸序列；

(2)具有SEQ?ID?NO：1中第(50±49)-(4724±49)位所示序列的核酸序列 (較佳是由SEQ?ID?NO：1第(50±49)-(4724±49)位所示序列組成的核酸序列)； 或

(3)與(1)或(2)限定的核酸序列有95％以上(優選99％以上)相同性且具有 指導目的基因表達功能的核酸序列。

在另一優選例中，(2)項中，具有SEQ?ID?NO：1中第(20±19)-(4754±19) 位所示序列的核酸序列。更優選的，是由SEQID?NO：1中第(20±19)-(4754± 19)位所示序列組成的核酸序列。

在另一優選例中，(2)項中，具有SEQ?ID?NO：1中第(10±9)-(4764±9) 位所示序列的核酸序列。較佳是由SEQ?ID?NO：1中第(10±9)-(4764±9)位所 示序列組成的核酸序列。

在本發明的第二方面，提供一種載體，所述的載體含有所述的核酸序列， 作為啟動子元件。

在另一優選例中，所述的載體還含有與所述的核酸序列可操作地連接的目 的基因序列。

在另一優選例中，所述的目的基因是外源基因。

在另一優選例中，所述的目的基因序列位于所述核酸序列的下游，且是與 所述的核酸序列直接鄰近的編碼基因的序列。

在另一優選例中，所述的核酸序列與目的基因序列的間隔是0-100bp(優選 的，為0-50bp；更優選的，為0-20bp)。

在另一優選例中，所述的目的基因包括(但不限于)：軸旁原鈣粘連蛋白基 因(Paraxial?Protocadherin(PAPC)、熒光素酶基因、熒光蛋白基因。