[發明專利]一種用于DNA檢測的納米金信號探針及其制備方法和DNA檢測的方法

無效

• 申請號: 200810032870.1
• 申請日: 2008-01-22
• 公開（公告）號: CN101245387A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 樊春海;劉興奮;王麗華;宋世平
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海應用物理研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/66;C12Q1/28
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 薛琦

1、一種用于DNA檢測的納米金信號探針，其為表面組裝有信號探針DNA的納米金顆粒，其特征是該納米金顆粒表面還同時組裝了可以產生顯色或熒光信號的蛋白質，所述的可以產生顯色或熒光信號的蛋白質為能催化底物生成具有顏色或熒光信號的產物的酶，或具有自發光性能的熒光蛋白。

2、根據權利要求1所述的納米金信號探針，其特征是所述的能催化底物生成具有顏色或熒光信號的產物的酶是辣根過氧化酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶或熒光素酶；所述的具有自發光性能的熒光蛋白是綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋或藻紅熒光蛋白。

3、根據權利要求1所述的納米金信號探針，其特征是所述的納米金顆粒的粒徑是10～20nm。

4、一種如權利要求1～3任一項所述的納米金信號探針的制備方法，其特征是其包括下列步驟：

1)將可以產生顯色或熒光信號的蛋白質溶液加入到納米金溶液中，調節pH，振蕩溫育，然后離心濃縮；

2)加入巰基修飾的信號探針DNA溶液，室溫溫育組裝；

3)加入封閉液封閉金顆粒表面的空余的結合位點，然后將此混合物離心、用洗滌液洗滌。

5、根據權利要求4所述的制備方法，其特征是步驟1)中所述的加入的可以產生顯色或熒光信號的蛋白質的摩爾量是納米金的1250～2500倍，所述的pH為7～9；步驟2)中所述的加入的巰基修飾的信號探針摩爾數為納米金的100～500倍。

6、根據權利要求5所述的制備方法，其特征是步驟1)中所述的加入的可以產生顯色或熒光信號的蛋白質的摩爾量是納米金的1250倍，所述的pH為9；步驟2)中所述的加入的巰基修飾的信號探針摩爾數為納米金的300倍。

7、根據權利要求4所述的制備方法，其特征是步驟3)中所述的封閉液為10mM?PB，100mM?NaCl，1.5w/v％PEG，1w/v％BSA，pH7.4的PBS緩沖溶液；所述的洗滌液為10mM?PB，0.1M?NaCl，pH7.4的PBS緩沖溶液；步驟1)或步驟3)所述的離心條件均為13,000rpm，30min，4℃。

8、根據權利要求4所述的制備方法，其特征是步驟3)洗滌后的納米金信號探針用等體積的儲備液重新懸浮，4℃儲存備用，所說的儲備液為含有10mM?PB，0.1M?NaCl，1w/v％BSA，0.01w/v％硫柳汞，pH7.4的PBS。

9、一種DNA的檢測方法，其特征是其包括以下步驟：

1)通過固定于磁性顆粒上的捕獲探針將靶向DNA連接在固相載體表面；

2)加入權利要求1～3任一項所述的納米金信號探針，通過DNA之間的雜交形成固相載體-靶向DNA-納米金信號探針的三明治復合物；

3)然后使該納米金信號探針上的可以產生顯色或熒光信號的蛋白質催化底物生成具有一定顏色或熒光的產物并進行顯色或熒光測定，或直接測定熒光蛋白自身的熒光信號。

10、根據權利要求9所述的檢測方法，其特征是步驟2)所述納米金信號探針的溶液中包含間隔DNA分子；步驟3)中所述的可以產生顯色或熒光信號的蛋白質為辣根過氧化酶時，加入其熒光底物3-(4-羥基苯丙酸)和H₂O₂進行反應，采用熒光法進行檢測。