[發明專利]豬2型圓環病毒PCR快速檢測試劑盒無效
| 申請號： | 200810032142.0 | 申請日： | 2008-08-25 |
| 公開（公告）號： | CN101343671A | 公開（公告）日： | 2009-01-14 |
| 發明（設計）人： | 劉道新;邱伯根;李曉成;陳杰;談志祥;邱立新;魯杏華;范仲鑫;何世成 | 申請（專利權）人： | 湖南省獸醫總站 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 410007*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 圓環 病毒 pcr 快速 檢測 試劑盒 | ||
1.一對豬2型圓環病毒特異性檢測引物Primer?P1/P2，其序列為：
Primer?P1：5’-CCGCGGGCTGGCTGAACTT-3’
Primer?P2：5’-ACCCCCGCCACCGCTACC-3’
其中Primer?P1/P2引物對在豬2型圓環病毒核酸中特異性擴增出1154bp的產物。
2.利用權利要求1所述引物組成的豬2型圓環病毒快速檢測試劑盒，其特征為：
采用DNA快速提取方法提取待檢組織樣品的DNA，按如下PCR反應體系和擴增程序， 用Primer?P1/P2引物對進行豬2型圓環病毒的RT-PCR擴增檢測。
PCR體系：PCR反應體系為25μL，包括10×PCR?buffer(含Mg2+)2.5μL，濃度分別為 2.5mmol/L的dNTPs?2μL，5U/μL?TaqDNA聚合酶0.5μL，20μmol/L?Primer?P1/P2各1μL， DNA提取溶液10μL，用雙蒸水補足25μL。
PCR擴增程序：94℃預變性5min；94℃1min、53℃1min、72℃1min，30個循環；最后 68℃延伸8min。4℃保存。
電泳檢測：取8μLPCR產物，混合1μL上樣緩沖液，1～1.5％的瓊脂糖凝膠電泳分析PCR 產物，以DNA分子量Marker為參考。
結果判斷：在陰性對照無條帶、陽性對照有明顯1154bp條帶的前提下，樣品出現1154bp 大小條帶定為豬2型圓環病毒核酸陽性，否則判為陰性。
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