[發(fā)明專利]一種檢測(cè)ADPRT基因多態(tài)性的檢測(cè)方法及試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810027882.5
• 申請(qǐng)日: 2008-05-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101570778A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏昭林;繆文彬;張忠彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 夏昭林;繆文彬;張忠彬
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1、一種檢測(cè)ADPRT基因多態(tài)性的檢測(cè)方法，其特征在于該檢測(cè)方法包括以下步驟：

a、以人基因組DNA為模板，在ADPRT基因位點(diǎn)所在區(qū)域設(shè)計(jì)基因序列正、反向引物，通過(guò)單堿基錯(cuò)配在正向引物引入一個(gè)酶切位點(diǎn)，并對(duì)模板基因組DNA進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增；

b、利用限制性內(nèi)切酶對(duì)其進(jìn)行酶切；

c、根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)上述ADPRT基因進(jìn)行片段大小分離，確定其基因多態(tài)性；

其中所述的ADPRT基因位點(diǎn)為Val762A1a(rs1136410)，所述的正向引物為：5’-TTTTGCTCCTCCAGGCCAAC*G-3’(*前的堿基為引入的錯(cuò)配堿基以創(chuàng)造酶切位點(diǎn))；所述的反向引物為：5’-CCTGACCCTGTTACCTTAATGTCAGTTTT-3’。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中步驟a中所述的PCR擴(kuò)增為在25μl反應(yīng)體系下，94℃預(yù)變性5min后，進(jìn)行30個(gè)如下循環(huán)擴(kuò)增：94℃變性40s，57℃退火40s，72℃延伸35s，最后72℃延伸5min。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其中所述的25μl反應(yīng)體系包括：1U?Taq?DNA聚合酶，10×Buffer?2.5μl，25mol/L?MgCl₂?2μl，2.5mmol/L?dNTPs?2.5μl，50ng人基因組DNA，10μmol/L上下游引物各1μl，由滅菌超純水補(bǔ)足25μl。

4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中步驟b中所述的限制性內(nèi)切酶為20μl?Bsh1236I酶切體系，所述的20μl?Bsh1236I酶切體系包括：10μl的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，10U/μl的Bsh1236I限制性內(nèi)切酶1μl，10×緩沖液2μl和7μl滅菌超純水。

5、一種檢測(cè)ADPRT基因多態(tài)性的試劑盒，該試劑盒包括擴(kuò)增用的基因特異性引物、dNTPs、用于PCR反應(yīng)的DNA聚合酶及其緩沖液，用于RFLP的限制性內(nèi)切酶Bsh1236I和相應(yīng)的緩沖液。

6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，該試劑盒包括：

正向引物為：5’-TTTTGCTCCTCCAGGCCAAC*G-3’；

反向引物為：5’-CCTGACCCTGTTACCTTAATGTCAGTTTT-3’；

1U?Taq?DNA聚合酶；

10×Buffer?2.5μl；

25mol/L?MgCl₂2μl；

2.5mmol/L?dNTPs?2.5μl；

10μmol/L上下游引物各1μl。

10單位Bsh1236I酶；

2μL的酶切緩沖液。