[發(fā)明專(zhuān)利]一種具有降解苯胺能力的污泥中華根瘤菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810026595.2
• 申請(qǐng)日: 2008-03-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101235358A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張國(guó)霞;任隨周;孫國(guó)萍;曾國(guó)驅(qū);許玫英
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C02F3/34;C02F11/02;C12R1/01;C02F101/38
• 代理公司: 廣州科粵專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 余炳和

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)菌領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種具有降解苯胺能力的污泥中華根瘤菌新菌種及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

苯胺是農(nóng)藥、醫(yī)藥和塑料工業(yè)的重要原料，廣泛存在于制藥、橡膠及其他許多化工廠的廢水中，苯胺與血紅蛋白結(jié)合成高鐵血紅蛋白，使之與氧結(jié)合能力下降導(dǎo)致動(dòng)物中毒，是一種對(duì)人類(lèi)構(gòu)成嚴(yán)重危害的物質(zhì)。微生物對(duì)苯胺的轉(zhuǎn)化與降解是從環(huán)境中去除苯胺的重要途徑。

中華根瘤菌屬由陳文新等在1988年建立的新屬。細(xì)胞染色為革蘭氏陰性。專(zhuān)性好氧，最適生長(zhǎng)溫度是25-30℃，但多數(shù)菌株在35℃和10℃下能生長(zhǎng)，最適pH6.0-8.0，多數(shù)菌株可生長(zhǎng)于10％NaCl。所有的菌株需要泛酸和煙酸，對(duì)維生素的要求差異大，氧化酶和接觸酶皆陽(yáng)性，共生固氮，寄主范圍很窄，只能在豆科植物上有效結(jié)瘤。但至今尚未發(fā)現(xiàn)中華根瘤菌屬中有降解苯胺的菌株。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提出一種具有降解苯胺能力的污泥中華根瘤菌新菌種及其在降解或去除苯胺的應(yīng)用。

本發(fā)明通過(guò)對(duì)廣州某石油化工廠的污泥進(jìn)行分離、純化，得到中華根瘤菌屬的一個(gè)新種，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該菌種具有降解苯胺的能力，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明所提出的新菌種命名為：污泥中華根瘤菌(Sinorhizobium?borbori)DN316。

本發(fā)明的污泥中華根瘤菌(Sinorhizobium?borbori)DN316已于2007年12月29日保存在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(地址：中國(guó)武漢市武漢大學(xué))，其簡(jiǎn)稱(chēng)為CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC?M?207212。

本發(fā)明的污泥中華根瘤菌(Sinorhizobium?borbori)DN316從廣州一石油化工廠的污泥進(jìn)行分離、純化而得。其分離純化方法如下：

首先把污泥打散，取1g污泥放在以苯胺(0.3mg/L)為唯一的液體基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基里培養(yǎng)(KH₂PO4?2.93g，K₂HPO₄5.87g，MgSO₄?0.3g，F(xiàn)eSO₄?0.01g，NaCl?2g，(NH₄)₂SO₄?5g，微量鹽溶液2mL)。固體培養(yǎng)基中加入16g瓊脂。微量鹽溶液(mg/L)：MoO₃?4mg，ZnSO₄·5H₂O?28mg，CuSO₄·5H₂O?2mg，H₃BO₃4mg，MnSO₄·5H₂O?4mg，CoCl₂·6H₂O?4mg。培養(yǎng)14d后，轉(zhuǎn)接到濃度分別為0.5mg/L，0.6mg/L，0.7mg/L，0.8mg/L進(jìn)行馴化.從0.8g/L的培養(yǎng)基里取1ml到以苯胺為唯一碳源的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，挑取單菌落在以苯胺為唯一碳源的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基上劃線純化，直到平板上為單一的純菌落即為純菌。

本發(fā)明的污泥中華根瘤菌(Sinorhizobium?borbori)DN316具有如下的形態(tài)和生理生化特性：

菌體的形態(tài)特性：

a.采用常規(guī)的細(xì)菌生理生化鑒定方法和電子顯微鏡觀察，中華根瘤菌的細(xì)胞為革蘭氏陰性，桿狀，菌體大小為0.7～0.8×1.8～2.5μm，周身鞭毛。

b.菌落的形態(tài)特性：

在LB固體培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)24h后，菌落形態(tài)為圓形，無(wú)色，有粘液，菌落直徑為1.5-2.4mm。

主要的生理生化特性：

嚴(yán)格好氧生長(zhǎng)，氧化酶和接觸酶都為陽(yáng)性。

上述結(jié)果表明本發(fā)明的污泥中華根瘤菌(Sinorhizobiumborbori)DN316與中華根瘤菌屬的生理生化特性很相似。

本發(fā)明的污泥中華根瘤菌(Sinorhizobium?borbori)DN316分子分類(lèi)地位：