[發明專利]家蠶絲腺生物工廠的建立方法及其制藥用途

無效

• 申請號: 200810025300.X
• 申請日: 2008-04-30
• 公開（公告）號: CN101270367A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發明（設計）人: 貢成良;曹廣力;薛仁宇;沈衛德
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/16;C12N15/27;A01K67/04;A61K35/64
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司
• 代理人: 陶海鋒

1.一種構建家蠶絲腺生物工廠的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)構建帶有家蠶絲腺特異性表達基因的啟動子X控制外源蛋白基因表達盒；

(2)構建帶有增強子元件en的基于piggyBAC轉座子的帶有熒光蛋白報告基因的載體pigA3-en；

(3)雙酶切步驟(1)所得載體，回收啟動子X控制外源基因的片段，克隆進同樣雙酶切的pigA3-en，得帶有增強子en和啟動子X控制外源基因的載體；

(4)構建昆蟲細胞內具有活性的啟動子Y控制抗生素抗性基因的重組載體；

(5)酶切步驟(4)所得載體，回收啟動子Y控制抗性基因的片段，克隆進同樣酶切的步驟(3)所得載體，得到帶有熒光蛋白報告基因和啟動子X控制外源基因表達盒、增強子元件、啟動子Y控制抗生素抗性基因的重組轉基因載體；

(6)步驟(5)所得重組轉基因載體，在輔助質粒的作用下，利用精子介導法導入初產卵，孵化，篩選獲得帶有抗生素抗性基因、熒光蛋白報告基因的家蠶，檢測到目的基因，育種制成轉基因家蠶。

2.根據權利要求1所述的構建家蠶絲腺生物工廠的方法，其特征在于：所述家蠶絲腺特異性表達基因啟動子X選自絲素蛋白重鏈基因啟動子、絲素蛋白輕鏈基因啟動子、絲膠蛋白-1基因啟動子或P25基因啟動子中的一種；昆蟲細胞內具有活性的啟動子Y為家蠶核型多角體病毒IE-1基因啟動子。

3.根據權利要求1所述的構建家蠶絲腺生物工廠的方法，其特征在于：所述外源蛋白基因是藥用蛋白基因，選自人胰島素樣生長因子-I基因、人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子基因中的一種。

4.根據權利要求1所述的構建家蠶絲腺生物工廠的方法，其特征在于：所述的增強子en選自家蠶絲素蛋白輕鏈基因第一內含子序列、桿狀病毒的同源區增強子序列中的一種。

5.根據權利要求1所述的構建家蠶絲腺生物工廠的方法，其特征在于：所述的抗性基因選自新霉素抗性基因neo抗性基因。

6.一種含有外源蛋白的藥物制備方法，其特征在于：采用權利要求1獲得的轉基因家蠶的絲腺經冷凍干燥后制成藥物。

7.一種含有外源蛋白的藥物制備方法，其特征在于：采用權利要求1獲得的轉基因家蠶進行蠶種繁殖，將獲得的家蠶的絲腺經冷凍干燥后制成藥物。