[發(fā)明專利]一種固定化米糠谷氨酸脫羧酶富集γ－氨基丁酸的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810025136.2
• 申請日: 2008-04-24
• 公開（公告）號: CN101265487A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發(fā)明（設計）人: 張暉;郭曉娜;王立;馬曉博;姚惠源
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12N11/04
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1、一種固定化米糠谷氨酸脫羧酶富集γ-氨基丁酸的制備方法，其特征是先將米糠粉碎、過篩，與一定濃度的海藻酸鈉溶液混合并攪拌均勻，裝入制球設備并逐滴滴入CaCl₂溶液中成球，硬化球體，清洗多余CaCl₂和未被固定化的米糠，得固定化米糠谷氨酸脫羧酶；將此酶與PBS緩沖溶液混合，并加入0.01-0.05mol/L的谷氨酸鈉作為底物，45℃搖床反應得γ-氨基丁酸富集液，烘干即得產品；

(1)米糠粉碎、過篩：先將米糠進行粉碎，要求過60目篩網；

(2)過篩后米糠與海藻酸鈉溶液混合：先配制質量濃度為2％的海藻酸鈉溶液，海藻酸鈉溶解完全后加入過篩米糠，使過篩米糠質量濃度控制6％，攪拌均勻，得混合液；

(3)制球：配制質量濃度為1％的CaCl₂溶液，保持溶液攪拌流動；將上步驟(2)的混合液裝進制球設備，保持1滴/s的滴出速度，在距液面10cm處滴入CaCl₂溶液中，立即成球；

(4)硬化：保持CaCl₂溶液流動，以使其中的球體懸浮，1h后傾去CaCl₂溶液；

(5)清洗：以等于CaCl₂溶液體積的去離子水替換CaCl₂溶液，保持攪拌，清洗球體，共換三次水，每次攪拌20min；

(6)潤洗：將去離子水換為PBS緩沖溶液，保持攪拌，潤洗球體，共換兩次PBS緩沖溶液，每次攪拌20min，得固定化谷氨酸脫羧酶；

(7)反應：以固定化谷氨酸脫羧酶∶PBS緩沖溶液質量比控制為3∶4的比例于保溫容器中，按0.01-0.05mol/L的濃度加入谷氨酸鈉，保持攪拌反應，溫度45℃，反應12小時后，得反應液；

(8)烘干：除去反應液中的水分，即得富集γ-氨基丁酸產品。

2、根據權利要求1所述固定化米糠谷氨酸脫羧酶富集γ-氨基丁酸的制備方法，其特征是原料米糠為新鮮的第一道米糠；PBS緩沖溶液的配制為0.05mol/LKH₂PO₄和0.05mol/L?Na₂HPO₄的混合溶液，pH值為5.6。