[發明專利]時間分辨熒光免疫分析中檢測洗滌殘留干擾的一種方法

有效

• 申請號: 200810022619.7
• 申請日: 2008-07-16
• 公開（公告）號: CN101324574A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 黃飚;王柯;馬智鴻;周彬;張藝;朱嵐;張玨
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

本發明涉及到一種對時間分辨熒光免疫分析中洗滌殘留干擾進行檢測的方 法，具體內容是采用在銪標試劑中添加釤離子為對照物判斷是否有洗滌殘留干 擾的方法，屬于時間分辨熒光免疫分析技術領域。

背景技術

時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)是醫學領域超微量檢測中一項新興的檢測 技術，是利用免疫反應的高度特異性和標記示蹤物的高度靈敏性相結合而建立 的一類微量物質檢測技術。TRFIA法的原理為用三價稀土離子(最常用的是銪 離子)標記蛋白質、多肽、抗體、激素等，當體系反應發生后，用時間分辨熒 光儀，測定最后產物的熒光強度。根據熒光強度或相對熒光強度比值，來判斷 反應體系被分析物的濃度，達到定量分析之目的。在DELFIA的免疫分析中， 增強液具有非常重要的作用，結合于免疫復合物上的稀土離子熒光信號非常微 弱，增強液可使免疫復合物上的稀土離子解離下來，熒光信號可放大100萬倍 以上，起到放大熒光效果的作用。

在TRFIA免疫分析中，由于增強液的強烈增強效果，一方面提高了檢測的 靈敏度，同時也容易放大誤差，所以在洗滌時，有可能會殘留未結合的稀土離 子，如果大于0.1％，就會明顯造成結果出現假陽性或假陰性。由于銪離子和釤 離子在溶液中是同時均勻分布的，銪離子的殘留比例與釤離子相同，由于銪離 子和釤離子的發射光的波長不同，銪離子最大激發波長340nm，最大發射波長 613nm，釤離子的最大激發波長340nm，最大發射波長600nm，因此釤離子對銪 離子沒有干擾，用時間分辨熒光儀(DELFIA1235、DELFIA1420等)進行銪離 子和釤離子的雙波長檢測，所以釤離子可作為在銪標記的TRFIA試劑反應中洗 滌殘留的示蹤劑。

發明內容

本發明的目的，旨在找到一種靈敏度高，操作簡便，對分析過程不造成影 響的方法，對銪標記的TRFIA中的洗滌殘留干擾進行檢測，從而避免一些由于 操作誤差造成的分析結果的假陽性或假陰性。

為達到上述目的，本發明的技術方案：一種在常用的銪離子標記的時間分 辨熒光免疫分析法TRFIA中檢測洗滌殘留的方法，它采用如下工作步驟：

(1)在銪離子標記的TRFIA試劑中的標記物中添加2-6萬cps/μL的釤離 子，添加無生物活性的釤離子僅用于示蹤洗滌殘留的量；當用反應緩沖液稀釋 銪離子標記物時，同時稀釋釤離子，釤離子的最終熒光強度計數控制在 100000-200000cps/孔；

(2)在微孔板上進行的TRFIA分析過程中當含有釤離子的銪標試劑與微孔 板上的物質反應完畢之后，用洗液洗板6次，通過洗滌去除未結合的銪標記物， 同時也洗滌去除釤離子；

(3)洗滌結束后加增強液，5分鐘后檢測，用進行雙波長測量的時間分辨 熒光儀分別測定每一孔的銪離子和釤離子的熒光強度cps，計算釤離子的殘留量， 判斷殘留中銪離子是否超標；計算釤離子的殘留比例：實測值/理論值×100％， 如果大于0.1％，則判定有洗滌殘留的干擾，該孔結果不可信。

本發明的有益效果：本發明方法是一種靈敏度高，操作簡便，對分析過程 不造成影響的方法，對銪標記的TRFIA中的洗滌殘留干擾進行檢測，從而避免 一些由于操作誤差造成的分析結果的假陽性或假陰性。

具體實施方式

實施例1：腫瘤標志物癌胚抗原(CEA)測定時的洗滌殘留干擾的檢測，該方 法包括如下工作步驟：

1、釤離子的添加：在銪標CEA單抗的溶液中，加入一定量的釤離子，使 釤離子濃度達到5萬cps/μL。